分光光度法測(cè)定脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)背景： 心血管疾病是危害人類健康的嚴(yán)重疾病，它是造成死亡的主要原因之一。2007年，根據(jù)我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查，近50年來(lái)無(wú)論在農(nóng)村或城市，心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢(shì)。根據(jù)目前已有的流行病學(xué)資料推測(cè)，到2020年，人類疾病死因排列順序?qū)⒂兄卮笞兓?，但冠心病和腦卒中仍將是人類死因的第一位和第二位。到那時(shí)，估算全球冠心病死亡人數(shù)將自1990年的630萬(wàn)增至1100萬(wàn)；腦卒中自440萬(wàn)增至770萬(wàn)。 動(dòng)脈粥樣硬化是

2、心腦血管疾病的病理生理基礎(chǔ)，防治動(dòng)脈粥樣硬化是目前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域急需解決的一個(gè)重要課題。現(xiàn)已證實(shí)炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展中起到關(guān)鍵作用。氧化低密度脂蛋白是一種存在于血漿中的危險(xiǎn)因子，能促進(jìn)炎癥發(fā)生，引起動(dòng)脈粥樣硬化。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2(Lp—PLA2)也稱血漿血小板激活因子乙酰水解酶，是介導(dǎo)氧化低密度脂蛋白引起炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化的一個(gè)關(guān)鍵酶。脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2是由炎癥細(xì)胞產(chǎn)生，水解低密度脂蛋白中的氧化修飾磷脂，主要與循環(huán)低密度脂

3、蛋白相關(guān)。近年來(lái)的研究認(rèn)為脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2是心血管疾病獨(dú)立的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因子。因此檢測(cè)患者血漿Lp—PLA2的活性，應(yīng)用Lp—PLA2抑制劑對(duì)其活性進(jìn)行調(diào)控是一種新的，潛在的，非降脂策略治療動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展方向。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?作為與心血管疾病密切相關(guān)的新的炎性標(biāo)志物，脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2逐漸成為研究熱點(diǎn)。為了進(jìn)一步更加方便地研究脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2的生理特性及其在心血管疾病中的病理生理學(xué)作用，研究開(kāi)發(fā)一種能檢測(cè)其活性的

4、試劑盒已成為必要。為此，我們合成了四種含有吸光基團(tuán)的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2底物，為開(kāi)發(fā)一種經(jīng)濟(jì)、快速及靈敏的脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性測(cè)定試劑盒(分光光度法)做鋪墊。 實(shí)驗(yàn)方法： 在適宜反應(yīng)條件下，分別以1-十四?；?-氫—3-磷脂酰乙醇胺(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphoethanolamine，14-PE)、1-十四?；?-氫—3-磷脂酰甘油(1-Myristoy1-2-hydroxy—

5、3-phosphoglycerol，14-PG)、1-十四?；?-氫—3-磷酸(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphate，14-PA)和1-十四?；?-氫—3-磷脂酰膽堿(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphocholine，14-PC)為模板，合成1-十四?；?-4-對(duì)硝基苯酚丁二酸酐—3-磷脂酰乙醇胺(1-Myristoy1-2-(4-nitrophenylsuccinyl)

6、phosphoethanolamine，14-NPE)、1-十四?；?-4-對(duì)硝基苯酚丁二酸酐—3-磷脂酰甘油(1-Myristoy1-2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphoglycerol，14-NPG)、1-十四?；?-4-對(duì)硝基苯酚丁二酸酐—3-磷酸(1-Myristoyl—2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphate，14-NPA)和1-十四?；?-4-對(duì)硝基苯酚丁二酸

7、酐—3-磷脂酰膽堿(1-Myristoy1-2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphocho line，14-NPC)四種含有吸光基團(tuán)的化合物作為L(zhǎng)p—PLA2活性測(cè)定試劑盒的候選底物。然后用酶對(duì)不同緩沖液下的底物進(jìn)行水解，篩選出吸光度變化最靈敏的一個(gè)做為L(zhǎng)p—PLA2活性測(cè)定試劑盒的候選底物。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.薄層色譜顯示我們已成功地合成了14-NPE、14-NPG、14-NPA和14-NPC。