羧酸酯酶在免疫性肝損傷大鼠體內(nèi)的活性研究.pdf

1、免疫性肝損傷與自身機(jī)體免疫應(yīng)答有關(guān)。由卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的急性免疫性肝損傷模型更能模擬由病毒或內(nèi)毒素引發(fā)的急性肝炎模型。在肝臟疾病狀態(tài)下,藥物代謝酶的活性可能會(huì)發(fā)生改變,從而會(huì)對(duì)藥物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)及藥物療效產(chǎn)生影響。
　　因此,本研究首先采用BCG+LPS法建立免疫性肝損傷大鼠模型,將SD大鼠隨機(jī)分為3組,低劑量LPS組,高劑量LPS組和正常對(duì)照組,先腹腔注射BCG(8mg),連續(xù)7d后,分別腹腔注射給予三組

2、大鼠5mg·kg-1 LPS,10mg·kg-1 LPS和等體積的生理鹽水。12h后,檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量變化,將肝臟經(jīng)HE染色,在光鏡下觀察病理學(xué)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常對(duì)照組相比,低劑量LPS組和高劑量LPS組大鼠血清ALT和AST活性顯著升高(P<0.05),且隨劑量的增加而升高;普通光鏡下觀察肝臟病理學(xué)變化,LPS組的大鼠肝臟出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和肝細(xì)胞壞死,且損傷程度隨LPS劑量的升高而加重。采用

3、BCG+LPS(5mg·kg-1)可以成功的建立免疫性肝損傷大鼠模型。
　　在模型建立成功的基礎(chǔ)上,我們考察了CES在免疫性肝損傷大鼠體內(nèi)的代謝活性,選取咪達(dá)普利和伊立替康(CPT-11)分別作為CES兩種同工酶CES1和CES2的特異性底物。我們首先建立了LC-MS/MS法和HPLC法測(cè)定血漿中咪達(dá)普利的活性代謝產(chǎn)物咪達(dá)普利拉和CPT-11的活性代謝產(chǎn)物SN-38的濃度,兩種方法均簡(jiǎn)便,快捷,專(zhuān)屬性好,在線(xiàn)性范圍內(nèi)靈敏,準(zhǔn)確,精

4、密度高,為研究藥物體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)打下了基礎(chǔ)。接著我們考察了咪達(dá)普利和CPT-11在免疫性肝損傷大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征。給模型組大鼠分別灌胃給予咪達(dá)普利(10mg·kg-1)和尾靜脈注射CPT-11(20mg·kg-1),正常對(duì)照組大鼠給予等體積生理鹽水,于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)采血,測(cè)定血漿中咪達(dá)普利拉和SN-38的濃度。結(jié)果顯示與正常對(duì)照組大鼠相比,模型組大鼠體內(nèi)咪達(dá)普利拉的AUC0-12h從1759.93±386.57mg·h-1·L-1降至6

5、20.93±197.16mg·h-1·L-1,Cmax從234.66±68.85mg·L-1下降至113.1±19.69mg·L-1(P<0.05);SN-38的AUC0-24h從646.1±110.9ng·h·mL-1降至275.9±52.5ng·h·mL-1,Cmax從145.6±15.9ng·mL-1下降至57.8±9.5ng·mL-1(P<0.05)。以上結(jié)果表明咪達(dá)普利和CPT-11在免疫性肝損傷大鼠體內(nèi)的代謝均受到了抑制,藥

6、動(dòng)學(xué)特征發(fā)生了改變。
　　最后,為進(jìn)一步考察CES1和CES2在免疫性肝損傷大鼠體內(nèi)表達(dá)特征的變化,我們采用熒光定量PCR(RT-PCR)和Western blot技術(shù)對(duì)肝臟中CES1和CES2的mRNA和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行分析。RT-PCR結(jié)果顯示,CES1 mRNA及CES2的兩種主要同工酶AB010635和AY034877的mRNA含量均比正常對(duì)照組含量低(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,CES1和CES2的