細胞周期素E在骨肉瘤和骨巨細胞瘤中表達的實驗研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文細胞周期素E在骨肉瘤和骨巨細胞瘤中表達的實驗研究姓名：朱海心申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：原銀棟2002.4.1室1992年1月至2001年7月的石蠟標(biāo)本，骨肉瘤26例、骨巨細胞瘤34例、骨軟骨瘤22例。所有標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)HE染色，由三位病理專家重新確診。其中骨巨細胞瘤按Jaffe分級I級15例，Ⅱ級15例，Ⅲ級4例。二、試劑：鼠抗人cyclinE單克隆抗體。SP試劑盒一套。以上試劑均購自福州邁新(Max

2、im)生物技術(shù)公司。實驗方法一、操作步驟：l、所有蠟塊均做5m厚連續(xù)切片，進行常規(guī)HE染色。2、免疫組化染色：骨肉瘤、骨巨細胞瘤和骨軟骨瘤石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟；梯度酒精水化；于檸檬酸緩沖液中高溫(92～98℃)煮沸2分30秒以修復(fù)抗原；3％H：O：作用10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性；加10％山羊血清，置于37℃溫箱內(nèi)30分鐘；加cyclinE一抗置于4。C冰箱內(nèi)過夜；加生物素標(biāo)記的二抗，置于37℃溫箱內(nèi)30分鐘；加HRP標(biāo)記的卵

3、白素工作液，置于37℃溫箱內(nèi)30分鐘；抗原恢復(fù)后，于每步操作之后，用PBS洗5分鐘，重復(fù)三次；DAB顯色。用已知cyclinE表達陽性的切片作為陽性對照，用PBS代替一抗，按上述步驟平行操作染色作為陰性對照。二、結(jié)果判定：用OLYMPUS生物顯微鏡觀察染色切片，以細胞核呈清晰棕色為陽性。高倍顯微鏡下觀察lO個視野，計數(shù)1000個腫瘤細胞。按陽性細胞所占比例分級：陽性細胞數(shù)50％為()；以細胞無棕色或與背景一致淺棕色為(一)。三、統(tǒng)計學(xué)處