面突外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的多向分化及永生化.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)旨在探討人早期胚胎面突外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的多向分化潛能,并對(duì)該細(xì)胞永生化進(jìn)行了初步研究,主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:一、胚胎面突外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定;50天流產(chǎn)自愿捐贈(zèng)的胚胎,酶消化法培養(yǎng)面突外胚間充質(zhì)干細(xì)胞,白血病抑制因子抑制分化.免疫細(xì)胞化學(xué)法染色顯示,細(xì)胞表達(dá)遷移中神經(jīng)嵴細(xì)胞特異的HNK-1;Vimentin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),顯示其間充質(zhì)特性;Ⅷ因子弱表達(dá);細(xì)胞不表達(dá)NF、GFAP、α-SMA、CK.結(jié)果表明,所獲得的細(xì)胞為未分

2、化的外胚間充質(zhì)干細(xì)胞,為進(jìn)一步研究其分化特性奠定了基礎(chǔ).二、外胚間充質(zhì)干細(xì)胞的自發(fā)分化; 自發(fā)分化包括體內(nèi)及體外研究.將培養(yǎng)的未分化外胚間充質(zhì)干細(xì)胞注入裸鼠皮下,1周時(shí)部分細(xì)胞出現(xiàn)壞死吸收,2周時(shí)無(wú)法找到注射的細(xì)胞,不排除細(xì)胞局部同化現(xiàn)象.在體外,去除白血病抑制因子后2天,外胚間充質(zhì)干細(xì)胞出現(xiàn)明顯向平滑肌細(xì)胞分化的現(xiàn)象,約65﹪的細(xì)胞表達(dá)平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)志α-SMA.2周,約有1﹪的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)纖維細(xì)絲蛋白NF,零星細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)膠質(zhì)纖

3、維酸性蛋白GFAP,同時(shí)細(xì)胞表達(dá)I型膠原.表明外胚間充質(zhì)干細(xì)胞有分化能力,自發(fā)分化呈現(xiàn)向平滑肌細(xì)胞優(yōu)勢(shì)分化的傾向.三、外胚間充質(zhì)干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化;利用生長(zhǎng)因子法誘導(dǎo)外胚間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分化.免疫細(xì)胞化學(xué)法圖象分析及半定量PCR顯示,TGF-β能有效促進(jìn)EMSC向平滑肌細(xì)胞分化,平滑肌細(xì)胞比例由自發(fā)分化的65﹪增加到近95﹪.在含β-甘油磷酸鈉、維生素C、地塞米松的礦化液中,EMSC被誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞,堿性磷酸酶

4、活性增強(qiáng),I型膠原染色陽(yáng)性,能形成礦化結(jié)節(jié),細(xì)胞表達(dá)成骨細(xì)胞特異的骨鈣素.四、外胚間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞的誘導(dǎo)分化;在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1和牙本質(zhì)非膠原蛋白的作用下,細(xì)胞在膠原三維培養(yǎng)體系中呈現(xiàn)成牙本質(zhì)細(xì)胞特異的形態(tài)改變,細(xì)胞出現(xiàn)極化,胞核位于一側(cè),另一側(cè)有很長(zhǎng)的突起,細(xì)胞平行排列;表達(dá)牙本質(zhì)特異的涎磷蛋白(DSPP);在礦化液中,誘導(dǎo)細(xì)胞能形成礦化結(jié)節(jié);在體內(nèi),含細(xì)胞的膠原也出現(xiàn)礦化趨勢(shì).表明EMSC已被成功誘導(dǎo)分化為終末期的成牙本