CA軟膏的研制.pdf

1、目的：以CA為模型藥物，對外用皮膚給藥制劑——軟膏進行研究。CA是一種免疫抑制劑，口服可治療排異反應，特應性皮炎等免疫性疾病，但是對于特應性皮炎等皮膚病，口服給藥劑量大，易引起不良反應，因此將其制備成局部外用制劑，以皮膚組織為滲透屏障，限制CA軟膏的全身吸收，從而達到治療特應性皮炎，直達病灶，增強療效，降低不良反應的目的。角質層是皮膚的天然屏障，如何使CA能夠有效地被皮膚吸收而義盡可能減少或不進入全身血液循環(huán)，是制備局部給藥制劑的關鍵。

2、 方法: 軟膏含量測定方法：建立高效液相測定軟膏含量的方法，對絕對回收率，相對回收率，精密度和靈敏度進行考察。 制備工藝考察：通過單因素考察，采用熔融法制備 CA局部皮膚外用軟膏，以軟膏的性狀，含量及含量均勻度為評價指標，在單因素試驗基礎上進行水浴熔融溫度為60，70，80℃，攪拌時間為5，10，15mih和攪拌速度為4000，7000，10000r/min的三因素三水平正交試驗確定制備軟膏的最佳工藝條件。

3、 促透劑篩選：將不同促透劑以5％的比例加入到軟膏中進行40℃，RH75％的條件下試驗，于0，15，30天取樣測定主藥含量考察藥物在促透劑中的穩(wěn)定性；將初步篩選的處方進行家兔單次及多次刺激性試驗，按照“皮膚刺激反應評分表”評分及“刺激強評分表”篩選促透劑；最后以進口軟膏為對照，利用Franz擴散池進行軟膏的體外滲透試驗，建立高效液相測定接受液中主藥濃度的方法，對絕對回收率，相對回收率，精密度和靈敏度進行考察，采用以尼龍膜為滲透屏障和以

4、鼠皮為滲透屏障的體外滲透試驗相互印證，考察相同含量促透劑、不同粘度和相同粘度、不同含量促透劑軟膏的滲透行為，擬合方程并確定最佳促透劑含量及粘度。軟膏的質量研究與穩(wěn)定性考察：對最佳處方進行主藥含量及含量均勻度的考察，進行高溫，高濕，強光條件下影響因素試驗長期試驗，考察其外觀，含量。 急性毒性試驗：以白色豚鼠為試驗對象，涂抹大劑量受試物，對皮膚進行急性毒性試驗。將豚鼠按體重，性別隨機分為三組：給藥組，空白基質組和空白對照組，分別考察

5、自制軟膏，空白賦型劑對豚鼠皮膚的急性毒性作用，并對各組豚鼠進行體重，呼吸，體毛，四肢活動，眼睛和粘膜，中樞神經系統(tǒng)的觀察，并記錄死亡率。 致敏性試驗：以白色豚鼠為試驗對象，將其按體重，性別隨機分為三組：陽性對照組，給藥組和賦型劑組。陽性對照藥物為二硝基氯苯，并將其配置成7％致敏濃度和0.5％激發(fā)濃度兩種丙酮溶液，在第1，7，14天時涂抹致敏濃度溶液，28天時涂抹激發(fā)濃度溶液進行激發(fā)，觀察其致敏現(xiàn)象。給藥組及賦型劑組按上述同樣方法

6、操作，與陽性對照組比較觀察致敏現(xiàn)象并計算致敏率。 藥效學試驗：以家兔為試驗動物，建立特應性皮炎模型，用二硝基氯苯對豚鼠進行致敏，激發(fā)，最后結成厚痂，使豚鼠的皮膚形成特應性皮炎。將豚鼠按體重，性別及結痂面積大小隨機分成四組：進口軟膏對照組，給藥組，賦型劑組和空白組。前三組每天涂抹受試物兩次，12小時一次，連續(xù)涂抹12天，并對四組皮炎的狀態(tài)及面積進行觀察，測量，以測定自制CA軟膏的療效。結果軟膏含量測定方法：建立的高效液相測定軟膏含

7、量的標準曲線為 A=12336C-7837.9(r=0.9999,n=7)，低，中，高三個濃度回收率分別是 100.2，100.4，99.67％，日內，日間 RSD分別為1.5，1.4，2.1％和2.4，1.9，2.3％。 制備工藝：通過正交試驗優(yōu)化了制備工藝，最后確定為：熔融溫度為70℃，攪拌時間為 10min及攪拌速度10000r/min。軟膏均勻細膩，含量合格。 促透劑選擇：在40℃，RH75％條件下，1＃，3

8、＃，4＃軟膏較穩(wěn)定，其他軟膏處方中CA的含量急劇降低：1＃促透劑對家兔皮膚輕度刺激，3＃，4＃軟膏對家兔無刺激：體外滲透試驗建立的高效液相測定接受液中主藥濃度的標準曲線為A=13.479C-373.4(r=0.9999,n=5)，低，中，高三個濃度回收率分別是 104.6，101.1，98.47％日內，日間RSD分別為4.0，1.4，1.8％和4.5，1.9，2.0％；以時間為橫坐標，累積滲透量為縱坐標擬合曲線表明，軟膏的滲透行為符合

9、Higuchi釋藥模型，以尼龍膜為滲透屏障和以鼠皮為滲透屏障的體外滲透試驗結果趨勢一致，均為滲透速率隨著軟膏粘度的增加或促透劑含量的增高而降低。以進口軟膏作為對照品，確定的處方為含有7.7％3＃促透劑的中等粘度的軟膏處方和含有10.9％4＃促透劑的中等粘度的軟膏處方。結合皮膚刺激性試驗，最后確定的處方為3＃。軟膏的質量研究：按3＃處方軟膏制備三批樣品，主藥平均含量為0.996mg/g，RH92.5％條件下軟膏含量明顯下降，無分層；60℃

10、條件下，軟膏含量第5天時測定含量變化不大，第10天時測定含量下降，膏體軟化，變?yōu)橐后w，混濁；40℃條件下含量變化不大，膏體軟化；4500±5001x條件下軟膏含量急劇下降：長期試驗在25℃，RH60％的條件下0，3，6，9個月的測定結果表明主藥含量穩(wěn)定。 急性毒性試驗：去除受試物后，連續(xù)7天對動物觀察顯示體重增長正常，呼吸，四肢運動，眼睛及粘膜，體毛和中樞系統(tǒng)均正常，動物無死亡。 皮膚致敏性試驗：經過二硝基氯苯的致敏激

11、發(fā)，陽性對照組豚鼠在第28天激發(fā)后均出現(xiàn)了陽性反應，致敏部位皮膚呈現(xiàn)紫色紅斑，72小時后仍不褪去；給藥組和空白基質組豚鼠致敏部位皮膚正常，72小時后持續(xù)呈陰性，顯示軟膏無致敏性。 藥效學試驗：利用二硝基氯苯成功地制造出特應性皮炎模型，炎癥部位呈現(xiàn)深紅色血痂；藥效學試驗研究結果顯示，給藥組與市售進口軟膏對照組的豚鼠皮炎愈合速度明顯快于賦型劑組和空白組，自制CA軟膏與市售進口CA軟膏療效無顯著性差別；空白基質療效與市售進口CA軟膏有