聯(lián)合應(yīng)用重組人骨保護(hù)素和二膦酸鹽抑制破骨細(xì)胞及治療骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、為降低OPG生產(chǎn)成本、減輕患者負(fù)擔(dān)并減少可能發(fā)生的副作用，本研究一方面構(gòu)建新OPG-Fc表達(dá)菌株，希望減少蛋白發(fā)酵過程的降解；另一方面試圖找到一種能夠與OPG聯(lián)合使用的藥物，從而更有效的聯(lián)合抑制破骨細(xì)胞。 本實(shí)驗(yàn)采用酵母菌SMD1168構(gòu)建新的OPG-Fc表達(dá)菌株——SMD1168/OPG-Fc，并且進(jìn)行了兩種表達(dá)菌株(X33/OPG-Fc和SMD1168/OPG-Fc)的發(fā)酵時(shí)程和OPG-Fc產(chǎn)量方面的對(duì)比研究。證明X33/O

2、PG-Fc在更短的時(shí)間內(nèi)使OPG-Fc產(chǎn)量達(dá)到要求；而SMD1168/OPG-Fc雖發(fā)酵過程較慢，但產(chǎn)生的雜蛋白較少，發(fā)酵獲得的OPG-Fc純度更高。X33/OPG-Fc和SMD1168/OPG-Fc發(fā)酵獲得的OPG-Fc經(jīng)純化后均可有效發(fā)揮抑制破骨細(xì)胞的活性。 在此基礎(chǔ)上本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了聯(lián)合應(yīng)用OPG和阿倫膦酸鈉(alendronate，ALN)抑制破骨細(xì)胞的研究。二膦酸鹽(bisphosphonate，BPs)類藥物，如ALN可

3、抑制破骨細(xì)胞的甲羥戊酸途徑(mevalonatePathway)中FPP合成酶(farnesyldiphosphatesynthase)從而有效地抑制破骨細(xì)胞分化并引起破骨細(xì)胞凋亡8。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示：聯(lián)合應(yīng)用rhOPG-Fc和ALN可更強(qiáng)烈地抑制破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化，更有效地抑制成熟破骨細(xì)胞及原代骨巨細(xì)胞瘤多核巨細(xì)胞的骨吸收功能。這兩種藥物在抑制破骨細(xì)胞分化和功能方面都表現(xiàn)出明顯地交互作用，且聯(lián)合應(yīng)用1/2劑量的rhOPG-Fc+AL

4、N的抑制破骨細(xì)胞和原代骨巨細(xì)胞瘤多核巨細(xì)胞的效果超過了單獨(dú)使用ALN或rhOPG-Fc。 在體外雌性大鼠去勢(shì)骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型中，本研究通過隨機(jī)分組對(duì)照，測(cè)量血尿骨轉(zhuǎn)換生化指標(biāo)、DXA骨密度和CT值骨量測(cè)定、腰椎和股骨生物力學(xué)檢測(cè)、病理組織形態(tài)學(xué)及骨形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)定，結(jié)果顯示聯(lián)合應(yīng)用rhOPG-Fc+ALN可更有效抑制雌激素缺乏所引起的骨丟失，其效果超過單獨(dú)使用ALN或rhOPG-Fc，兩種藥物在降低血清骨鈣素、增加腰椎骨密度、增加

5、椎體抗壓縮能力等方面均顯示交互作用，且應(yīng)用1/2(rhOPG-Fc+ALN)后，其抗骨質(zhì)疏松的能力與單獨(dú)使用ALN和rhOPG-Fc相當(dāng)。 綜上所述，本研究采用酵母菌SMD1168構(gòu)建新的OPG-Fc表達(dá)菌株——SMD1168/OPG-Fc，證明SMD1168/OPG-Fc雖較X33/OPG-Fc發(fā)酵過程較慢，但產(chǎn)生的雜蛋白較少，發(fā)酵獲得的OPG-Fc純度更高。獲得的OPG-Fc經(jīng)純化后可有效發(fā)揮抑制破骨細(xì)胞的活性。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)