利用微衛(wèi)星（SSR）分子標(biāo)記進(jìn)行油松無(wú)性系種子園及其子代群體結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、本文應(yīng)用微衛(wèi)星(SSR)分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)遼寧興城一油松無(wú)性系種子園及其自由授粉子代群體的遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，為種子園的營(yíng)建以及高世代種子園的改建提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下： 1)以油松總DNA為材料，從其他樹種中應(yīng)用的101對(duì)SSR引物中篩選出擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性豐富的SSR引物11對(duì)，分析了Taq聚合酶、模板濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度以及引物濃度對(duì)SSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果的影響，建立了穩(wěn)定的、可重復(fù)的油松SSR

2、-PCR最佳反應(yīng)體系及PCR擴(kuò)增參數(shù)。研究結(jié)果表明：在15μLSSR-PCR反應(yīng)體系中，模板DNA最適宜濃度為2ng/μL，Mg2+的最適濃度為0.25mmo1·L-1；dNTP最適濃度為0.2mmo1·L-1；單引物的最適濃度均為250μmo1·L-1；Taq聚合酶在15μL反應(yīng)體系中宜加入0.375U。 2)統(tǒng)計(jì)利用所選11對(duì)引物對(duì)同一油松種子園內(nèi)49個(gè)建園無(wú)性系和子代群體進(jìn)行了SSR-PCR反應(yīng)，通過6％的變性聚丙稀酰胺凝

3、膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明：每對(duì)引物擴(kuò)增產(chǎn)物在100～250bp之間的等位譜帶數(shù)，最多為10，最少為5，平均為7.7273。 3)建園無(wú)性系群體具有較高的遺傳多樣性。建園無(wú)性系基因多樣度(PIC)值為0.7435，同其他樹種相比差異顯著，都保持在較高水平。群體的平均觀測(cè)雜合度Ho為0.7098，平均期望雜合度He為0.7263，觀測(cè)雜合度略微偏低。除PtTX4001實(shí)際觀測(cè)雜合度低于期望雜合度較多外，其余各位點(diǎn)實(shí)際觀測(cè)雜合度與期望

4、雜合度均差異不顯著。平均固定指數(shù)(F)值為0.0086，表明親代群體的雜合體和純合體相差不多。Fst值從0.0080(PtTX2146)到0.2527(PtTX4011)，平均值為0.0576，即有5.76％的遺傳變異存在于群體之間，說(shuō)明遺傳變異主要存在于群體之內(nèi)(94.24％)。 4)子代群體同種子園無(wú)性系(親代)相比，各項(xiàng)多樣性參數(shù)相近，遺傳多樣性只是略微有所降低，仍然保持較寬的遺傳基礎(chǔ)。11個(gè)位點(diǎn)中，有一個(gè)位點(diǎn)(PR011

5、)觀測(cè)雜合度顯著高于期望雜合度，而在余下的10個(gè)位點(diǎn)中，除位點(diǎn)PR4.6的觀測(cè)雜合度略低于期望雜合度的值外，其余9個(gè)位點(diǎn)的觀測(cè)雜合度均顯著低于期望雜合度的值。平均觀測(cè)雜合度的值(0.5753)也明顯低于平均期望雜合度的值(0.7335)，表明子代群體多數(shù)位點(diǎn)偏離了Hardy-Weingerg遺傳平衡，可能是親代群體在基因世代傳遞過程中遭受到了非隨機(jī)因素影響造成的。除位點(diǎn)PR011的Fis值為負(fù)值外，其余均為正值，說(shuō)明子代群體多數(shù)位點(diǎn)純合