河北省腎綜合征出血熱疫源地病原基因型及其分布特征研究.pdf

1、目的：了解河北省腎綜合征出血熱疫源地鼠密度、鼠種構(gòu)成、帶毒率及宿主動物所攜帶漢坦病毒基因型和亞型的分布，分析漢坦病毒核苷酸序列變異情況，指導對本病的預防和控制。 方法： 1.疫源地調(diào)查，夾夜法捕鼠，無菌取鼠肺； 2.用冷凍切片機切鼠肺，冷丙酮固定后，間接免疫熒光法篩選漢坦病毒陽性鼠肺； 3.從陽性鼠肺中提取漢坦病毒RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA； 4.根據(jù)已知漢坦病毒標準毒株的基因序列設計SEO型和H

2、TN型型特異性引物，用反轉(zhuǎn)錄套式聚合酶鏈反應(RT-nestedPCR)擴增，進行基因分型； 5.選擇不同地區(qū)鼠肺PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)純化回收后進行序列測定，根據(jù)G1和G2片段分別構(gòu)建系統(tǒng)進化樹，對河北省漢坦病毒的基因亞型分布、核苷酸變異及特征進行分析。 結(jié)果： 1.2004～2005兩年的鼠間疫情資料顯示褐家鼠占總捕獲鼠種的77.52％，是河北省的優(yōu)勢鼠種。河北省宅區(qū)鼠種主要為褐家鼠和小家鼠，分別占宅區(qū)總捕獲鼠種的

3、88.41％和10.85％；野外鼠種主要為褐家鼠、黑線姬鼠和大倉鼠，分別占野外總捕獲鼠種的50.61％、13.72％和11.28％。河北省宅區(qū)鼠密度為1.88％，高于野外鼠密度(1.14％)。 2.將1139份鼠肺冷凍切片，冷丙酮固定后用間接免疫熒光法進行檢測，陽性鼠肺共35份，陽性率為3.07％。我省腎綜合征出血熱疫源地帶毒鼠主要以宅區(qū)褐家鼠為主，其次為宅區(qū)小家鼠，野外帶毒鼠不是主要傳染源。 3.對河北省漢坦病毒陽性鼠

4、肺同時用SEO型和HTN型分型引物進行RT-nestedPCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)1％的瓊脂糖凝膠電泳后顯示22份陽性鼠肺所攜帶漢坦病毒均為SEO型，未發(fā)現(xiàn)HTN型。 4.從小家鼠、小倉鼠、社鼠和田鼠四個河北省非優(yōu)勢種群的鼠肺中擴增出423bp的特異性目的條帶，證明它們攜帶有SEO型漢坦病毒，存在“宿主溢出”現(xiàn)象。再次發(fā)現(xiàn)倉鼠亞科宿主動物攜帶SEO型漢坦病毒。 5.漢坦病毒G1(195-573nt)區(qū)基因變異不大，同源性高達94

5、.7％～100％，且均與R22株的同源性接近，高達94.5％～99.2％，與76-118株的司源性較低，儀為69.9％～71.2％。G2(2002-2301nt)區(qū)同源性高達94.3％～100％，與R22株和76-118株的同源性分別為93.3％～99％和67.0％～69.0％，可見同型之間M片段的基因序列相對比較保守。核苷酸變異既有轉(zhuǎn)換也有顛換。 6.部分G1和G2片段的核苷酸同源性比較及系統(tǒng)進化樹分析表明所測漢坦病毒均為SE

6、O型，且以S3亞型為主，未發(fā)現(xiàn)新亞型。除承德一小家鼠所攜帶漢坦病毒根據(jù)G1片段構(gòu)建進化樹分型為S4亞型，根據(jù)G2片段分型為S3亞型外，G1和G2片段的分型結(jié)果基本一致。 結(jié)論： 1.褐家鼠、小家鼠是河北省宅區(qū)主要鼠種，褐家鼠、黑線姬鼠和大倉鼠是野外主要鼠種。褐家鼠是河北省的優(yōu)勢鼠種，并且是腎綜合征出血熱的主要傳染源。 2.河北省疫源地宿主動物所攜帶的漢坦病毒基因型以SEO型為主，基因亞型以S3亞型為主，且在河北省