食品中腸出血性大腸桿菌O157∶H7和鼠傷寒沙門氏菌同時(shí)快速檢測方法的研究.pdf

1、腸出血性大腸桿菌O157：H7（Escherichia coli0157：H7）和鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）是目前世界公認(rèn)的引起食源性疾病的重要致病菌。本研究針對(duì)傳統(tǒng)檢測方法耗時(shí)長、過程繁瑣的缺點(diǎn)，建立了同時(shí)檢測食品中腸出血性大腸桿菌O157：H7和鼠傷寒沙門氏菌的快速免疫檢測方法。具體結(jié)果如下：
　　 1、為了制備抗腸出血性大腸桿菌O157：H7和鼠傷寒沙門氏菌的特異性抗體，本研究制備了兩類

2、免疫原包括鹽酸胍提取的細(xì)胞表面蛋白免疫原（GCSPE，GCSPS）與熱致死（HKE，HKS）和福爾馬林致死（FKE，F(xiàn)KS）整細(xì)胞免疫原。
　　 2、用腸出血性大腸桿菌O157：H7細(xì)胞表面蛋白為免疫原，經(jīng)過小鼠的免疫，細(xì)胞融合最后得到19個(gè)雜交瘤細(xì)胞系能夠產(chǎn)生E.coli0157：H7特異抗體，其中1D11雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的單克隆抗體對(duì)E.colo0157：H7具有很強(qiáng)的特異性和親和力，抗體的效價(jià)達(dá)到了1:25600。

3、　　 3、用鼠傷寒沙門氏菌細(xì)胞表面蛋白為免疫原，最終獲得了12個(gè)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗Salmonella typhimurium的抗體，其中2G6雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的單克隆抗體對(duì)Salmonella typhimurium具有很強(qiáng)的特異性和親和力，抗體的效價(jià)達(dá)到了1:12800.
　　 4、用整細(xì)胞為免疫原，經(jīng)過對(duì)產(chǎn)蛋雞的免疫，WD-AS的分離純化分別獲得了抗E.coli0157：H7和Salmonella typhimurium的

4、特異性好，親和力強(qiáng)的卵黃多克隆抗體。E.coli0157：H7的卵黃抗體的效價(jià)和Salmonella typhimurium卵黃抗體的效價(jià)都達(dá)到了1:3200。
　　 5、利用制備的40nm膠體金標(biāo)記單克隆抗體1D11和2G6，用卵黃抗體作為檢測抗體，分別建立了E.coli0157：H7免疫層析檢測試紙條和salmonella typhimurium免疫層析檢測試紙條。試紙條特異性強(qiáng)，可分別檢測到105CFU/ml的E.coli