計算機(jī)輔助數(shù)字圖像分析系統(tǒng)定量檢測TGFβ1和FN與肝纖維化相關(guān)性的應(yīng)用研究.pdf

1、前言 肝纖維化是許多慢性肝病發(fā)展的普遍結(jié)果,可最終導(dǎo)致肝硬化和儲備功能低下,是一種嚴(yán)重威脅人類健康的慢性疾病.研究肝纖維化發(fā)展過程及發(fā)病機(jī)理、以及客觀評價肝纖維化程度,有極其重要的意義.該文通過對肝穿刺標(biāo)本的幾種不同特殊組織學(xué)染色及應(yīng)用計算機(jī)輔助數(shù)字圖像分析系統(tǒng)定量檢測TGFβ1和FN與肝纖維化的關(guān)系,從而補(bǔ)充和發(fā)展了肝纖維化的分子水平研究方法.并試圖取得計算機(jī)測量方法的可靠性.材料與方法 實驗方法:2.1用快速肝穿法取材,至少1厘米長

2、的肝組織,福爾馬林固定,石蠟包埋,每一組織切4張4μm厚的切片.分別行HE染色、Masson染色、TGFβ1染色、FN染色.2.2病理分級:首先由兩位資深的病理學(xué)專家在不了解病人臨床背景的情況下,在四張切片中隨機(jī)選兩張,分別進(jìn)行HE染色、Masson染色,按2000年中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂《病毒·1·性肝炎防治方案》中慢性肝炎分期標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行纖維化程度(S)分期,判定肝纖維化程度,當(dāng)兩人有分歧時,則參考第三位

3、病理學(xué)專家的意見.2.3實驗分組:按肝纖維化程度的分級分為以下5組:S<,0>組(n=7)、S<,1>組(n=12)、S<,2>組(n=15)、S<,3>組(n=16)、S<,4>組(n=7).再在每組剩下的兩張切片中隨機(jī)選一張切片分別進(jìn)行TGFβ1和FN免疫組織化學(xué)測定.按試劑盒說明操作,結(jié)果判定.TGFβ1的免疫組化:陽性產(chǎn)物位于胞漿,陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)為該位置出現(xiàn)棕黃色顆粒;FN的免疫組化測定:陽性產(chǎn)物位于細(xì)胞外,呈棕黃色顆粒.于40倍

4、物鏡下用OLYMPUS C3040-ADU彩色圖像攝錄輸入儀將圖像輸入Meta Morph/DP10/BX41彩色圖像分析儀,每張切片選取四周及中央5個區(qū)域,均取該區(qū)域陽性反應(yīng)最多的視野,測陽性反應(yīng)面積比(陽性面積/肝組織面積×100％),即平均光密度值,再取平均值.Masson染色:膠原纖維染色成藍(lán)色.該方法是測量其染成藍(lán)色的像素和,除以組織切片的總像素,得出膠原纖維所占部分的面積比.三者均用陽性反應(yīng)面積比來代表其實際水平.3.統(tǒng)計學(xué)

5、處理:計量資料用x±s表示,采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差齊性檢驗,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行ANOVA(單因素方差分析)及Spearman相關(guān)分析,P<0.05時就認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義.結(jié)論1.肝纖維化早期時TGFβ1就明顯增高,其增高程度與纖維化分級成正相關(guān).2.FN隨著肝纖維化分級程度增加表達(dá)增高,但在肝硬化時卻減少.3.該研究表明圖像分析法的測量結(jié)果與分級法的判斷有顯著的相關(guān)關(guān)系,同時又是定量評估肝纖維化的程度,給臨床判斷病情及藥物療效