聯(lián)合應(yīng)用三氧化二砷與紫杉醇誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:探討聯(lián)合應(yīng)用三氧化二砷(arsenic trioxide，As2O3)與紫杉醇(paclitaxel，PTX)誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞凋亡的作用及其機(jī)制，研究對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期以及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，為結(jié)腸癌化學(xué)治療提供理論依據(jù)，從而為臨床上結(jié)腸癌的治療提供新的思路及方法。
　　方法:體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞(CT26)，按比例稀釋As2O3以及PTX，使As2O3終濃度為0、1.0、2.0、4.0、8.0μmol

2、/L，使PTX終濃度為0、0.1、0.2、0.4及0.8μmol/L，處理CT26細(xì)胞72h后，以MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖率，選擇30％左右抑制濃度的As2O3與不同濃度的紫杉醇聯(lián)合處理細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增值率，以抑制增殖效果最為明顯的劑量組進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn);用倒置相差顯微鏡觀察在不同濃度和不同時(shí)間作用下，細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期CT26細(xì)胞接種于6孔板培養(yǎng)24h，分別以對(duì)照、2μmol/LAs2O3、0.04μmol/LPTX以及2μ

3、mol/LAs2O3+0.04μmol/LPTX處理細(xì)胞72h，以流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)藥物處理后各組細(xì)胞周期及凋亡率;分別收集對(duì)照，2μmol/LAs2O3、0.04μmol/LPTX以及2μmol/LAs2O3+0.04μmol/LPTX處理細(xì)胞72h后的細(xì)胞，采用WesternBlot法檢測(cè)藥物處理后，細(xì)胞中Bax,Blc-2以及PARP的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:分別以不同濃度的As2O3處理小鼠結(jié)腸癌CT26細(xì)胞72h，以MTT

4、法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，不同濃度的As2O3均能夠抑制CT26細(xì)胞增殖，呈劑量效應(yīng)關(guān)系;以2.0μmol/LAs2O3分別與不同濃度的PTX聯(lián)合處理CT26細(xì)胞72h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2.0μmol/LAs2O3能夠與不同濃度PTX聯(lián)合抑制細(xì)胞增殖，用factorialanalysis分析兩藥聯(lián)用的性質(zhì)，結(jié)果顯示兩藥具有交互作用(P＜0.05)，其中，2μmol/LAs2O3與0.04μmol/LPTX聯(lián)合效果最佳，其機(jī)制可能是二藥聯(lián)用抑制或阻斷

5、了細(xì)胞增殖和生存相關(guān)因素的作用，從而協(xié)同影響了CT26細(xì)胞增殖及存活。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示:1.As2O3單藥作用可使細(xì)胞周期阻滯于G1期，與對(duì)照組相比增加了33.08％。PTX單藥要使細(xì)胞阻滯于G2/M期（40.22±3.71％，對(duì)照組4.45±1.82％）。聯(lián)合用藥后，S期明顯下降至17.88％（對(duì)照組60.20±3.85％），細(xì)胞主要阻滯于G1期和G2/M期。2.2μmol/LAs2O3與0.04μmol/LPTX聯(lián)合處理能夠協(xié)