載體攜帶小干擾RNA抑制人舌癌Tca8113細(xì)胞VEGF的表達(dá)以及腫瘤生長(zhǎng)的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：了解載體攜帶的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對(duì)人舌癌細(xì)胞株(tongue squamous carcinoma cell line，Tca8113)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達(dá)的抑制作用以及對(duì)腫瘤細(xì)胞和移植瘤血管生成和生長(zhǎng)的影響。 方法：采用兩對(duì)針對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的siRNA真核表達(dá)載體(PU-VEGF-si

2、RNA1,PU-VEGF-siRNA2)，以空載體組做實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，經(jīng)脂質(zhì)體lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染Tca8113細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株，未轉(zhuǎn)染組做空白對(duì)照組。采用MTT檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Tca8113細(xì)胞的增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染后Tca8113細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞周期，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后VEGF mRNA表達(dá)情況；將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的各組細(xì)胞接種裸鼠，每組5只，接種后7天開始，每4天測(cè)量瘤體積，

3、繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，比較各時(shí)間段腫瘤生長(zhǎng)情況，接種后47天處死，比較瘤體體積和瘤重。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)裸鼠腫瘤組織VEGF的表達(dá)并評(píng)價(jià)腫瘤微血管密度，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法(TUNEL)定量檢測(cè)裸鼠模型的腫瘤組織凋亡。 結(jié)果：與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和空白對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染PU-VEGF-siRNA載體后Tca8113細(xì)胞的增殖減緩，凋亡率增加，VEGF mRNA表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。細(xì)胞周期結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組

4、S期改變與對(duì)照組細(xì)胞S期改變差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，與實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和空白對(duì)照組相比較，2個(gè)實(shí)驗(yàn)組腫瘤生長(zhǎng)速度降低，裸鼠接種腫瘤生長(zhǎng)緩慢，處死后測(cè)量到瘤體體積小、重量輕(P＜0.05)，而實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和空白對(duì)照組瘤體體積、瘤重均無(wú)明顯差異(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)組VEGF表達(dá)和腫瘤微血管密度明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組可見大量凋亡細(xì)胞，對(duì)照組僅見少許凋亡細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組凋亡指數(shù)與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜