雪峰蟲草生活史研究.pdf

1、雪峰蟲草Ophiocordyceps xuefengensis T.C.Wen是近年來發(fā)現(xiàn)的蟲革新種，是雪峰蟲草菌與癤蝙蛾幼蟲的復(fù)合體，研究發(fā)現(xiàn)雪峰蟲草與冬蟲夏草親緣關(guān)系最為接近。目前，對于雪峰蟲草的研究，已有其顯微特征和化學(xué)成分方面的報(bào)道，但關(guān)于其人工培育及生活史的報(bào)道尚未出現(xiàn)。本文首次對雪峰蟲草的生活史進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，主要內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.雪峰蟲草的人工培育
　　優(yōu)化雪峰蟲草的培育條件，觀察各個階段的生長狀

2、況，同時收集孢子進(jìn)行萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明:菌絲初期呈白色，細(xì)絨毛狀，成熟后呈淡銹色;成熟的菌絲互相扭結(jié)，形成小原基，小原基逐漸膨大，分化為無性子座，子座頂端呈白色，中下部呈淡銹色;繼續(xù)培育，無性子座逐漸增大，頂端仍呈白色，中下部呈深銹色;分生孢子可萌發(fā)，形成菌絲體。
　　2.雪峰蟲草不同發(fā)育時期形態(tài)解剖學(xué)觀察
　　取不同發(fā)育時期的雪峰蟲草，制作臨時裝片，用剛果紅溶液染色，結(jié)果表明:
　　a.菌絲有隔膜，分支。
　　

3、b.菌絲間有“H”型融合象。
　　c.分生孢子梗單生，不分支或分支。
　　d.無性子座可以分為皮層和髓部。
　　取無性子座，冷凍干燥、噴金后通過透射電鏡觀察，結(jié)果表明:無性子座表面密布著無性孢子，孢子呈卵圓形或圓形，大小為(3.2～5.0)um×(2.1～3.3)um，且表面光滑，每個產(chǎn)孢細(xì)胞均只產(chǎn)生一個分生孢子。子座的皮層與髓質(zhì)都是由菌絲細(xì)胞構(gòu)成，皮層細(xì)胞較小且排列緊密，髓質(zhì)細(xì)胞之間有明顯的間隙。
　　用熒光染

4、料DAPI分別對成熟菌絲、無性子座表面菌絲和分生孢子染色，熒光顯微鏡觀察，結(jié)果表明:不同生長階段的菌絲細(xì)胞粗細(xì)長短不等，但隔膜清晰可見。成熟菌絲細(xì)胞和無性子座表面菌絲細(xì)胞均存在單核、雙核現(xiàn)象，但分生孢子為單核。
　　3.SNPs分子標(biāo)記在雪峰蟲草生活史研究中的應(yīng)用
　　本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建雪峰蟲草的基因組文庫，以基因組文庫為模板設(shè)計(jì)了30對引物，用同一引物對對不同菌株進(jìn)行擴(kuò)增，序列比對、分析，比較不同菌株或樣品基因型的差異。在雪峰

5、蟲草中，鑒定出36個SNPs位點(diǎn)，SNP發(fā)生率為0.129％。通過分析基因序列和圖譜，證實(shí)雪峰蟲草的菌絲體及無性子座均是同核體，成熟子座中的可育部分（具有子囊殼）是異核體。
　　4.雪峰蟲草交配型基因MAT1-1-1與MAT1-2-1的檢測
　　基于冬蟲夏草交配型基因MAT1-1-1與MAT1-2-1的保守序列分別設(shè)計(jì)特異性引物，對不同雪峰蟲草樣本進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)檢測、分析發(fā)現(xiàn):雪峰蟲草的僵蟲體、分離菌株、子座柄（未具有子囊殼）

6、均只含單一交配型基因MAT1-1-1或MAT1-2-1，而在子座的可育部位（具有子囊殼）則同時具有MAT1-1-1和MAT1-2-1兩種交配型基因。從多種樣本檢測結(jié)果表明:雪峰蟲草是以異宗配合的方式進(jìn)行有性生殖。
　　綜上所述，我們推測雪峰蟲草的生活史為:在野外環(huán)境中，雪峰蟲草菌的孢子侵染癤蝙蛾幼蟲，在蟲體內(nèi)孢子萌發(fā)長出菌絲。當(dāng)菌絲生長到一定階段，扭結(jié)形成僵硬的菌核。在一定環(huán)境條件下，只含單一交配型基因的同核體菌絲可形成無性子座，