基于DNA芯片技術的Reelin信號通路相關基因多態(tài)性及基因間交互作用與漢族兒童孤獨癥關系的研究.pdf

1、目的：
　　 (1)研究Reelin信號通路相關基因的多態(tài)性與漢族兒童孤獨癥的關聯(lián)；
　　 (2)研究Reelin信號通路相關基因的交互作用與漢族兒童孤獨癥易感性的關系；
　　 (3)研究Reelin信號通路相關基因的多態(tài)性與漢族兒童孤獨癥臨床表型的關系。
　　 方法：
　　 (1)采用Illumina CNV370-Duo芯片對455例符合DSM-Ⅳ診斷標準的兒童孤獨癥患者及97例正常對照進行全

2、基因組SNP分型，從中選取Reelin信號通路6個基因(RELN、DAB1、VLDLR、LRP8、FYN、CDK5)所有SNP的數(shù)據(jù)，與中南大學醫(yī)學遺傳學國家重點實驗室遺傳資源庫的另外358例正常對照的相應數(shù)據(jù)合并，對數(shù)據(jù)進行篩選，然后對每個基因均采用Haploview4.1軟件進行單位點的病例-對照關聯(lián)分析，以及基于連鎖不平衡分析基礎上的單體型病例-對照關聯(lián)分析。置換檢驗被用于對關聯(lián)分析的結果進行校正（置換次數(shù)＝1000）。
　

3、　 (2)采用“標記SNP＋連鎖結構域”策略選擇基因間交互作用研究的SNP位點，6個基因共計入選48個位點。多因子降維分析(MDR)方法被用于探索孤獨癥患者Reelin信號通路相關基因間的交互作用，選擇具有最大的交叉驗證一致性、最大檢驗準確度且置換檢驗結果具有顯著性的組合作為基因間交互作用的最佳模型。
　　 (3)剔除15例臨床資料不完整的患者，將440例孤獨癥患者按照“退化”臨床表型分為退化組（180例）和非退化組（260例

4、），按照“不遵從行為”臨床表型分為不遵從組（177例）和遵從組（263例），x2檢驗被用于比較上述48個位點基因型頻率和等位基因頻率的組間差異。
　　 結果：
　　 (1)經(jīng)置換檢驗后，單位點關聯(lián)分析顯示RELN的99個SNPs與孤獨癥均無顯著關聯(lián)（P均大于0.05）；單體型關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)AAGTATCATGGG單體型頻率和CTTAGCCG單體型頻率在對照組顯著高于孤獨癥組（x2分別為8.658，10.000；校正后的P值

5、分別為0.015，0.002）；
　　 (2)經(jīng)置換檢驗后，單位點關聯(lián)分析顯示DAB1的154個SNPs與孤獨癥均無顯著關聯(lián)（P均大于0.05），單體型關聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)GGTTTGGCATTTC單體型頻率在孤獨癥組顯著高于對照組（x2＝8.461，校正后的P＝0.019）；
　　 (3)經(jīng)置換檢驗后，LRP8、VLDLR、FYN和CDK5所有SNPs的等位基因頻率及單體型頻率在孤獨癥組和對照組無顯著性差異（P均大于0.05）

6、；
　　 (4) MDR分析顯示三位點基因型組合（rs1454627-rs6943822-rs722187)是孤獨癥患者Reelin信號通路相關基因間交互作用的最佳模型（交叉驗證一致性9/10，檢驗準確度0.822，P＜0.001）；
　　 (5) RELN的rs10487160位點的基因型分布和等位基因分布在退化型孤獨癥亞組和非退化型孤獨癥亞組間均存在顯著性差異（x2分別為10.570和10.190，P值分別為0.00

7、5和0.001），退化亞組GG基因型頻率與G等位基因頻率顯著高于非退化亞組；rs12666897位點的基因型分布和等位基因分布在兩個亞組間亦存在顯著性差異（x2分別為6.019和4.874，P值分別為0.049和0.027），退化亞組AC基因型頻率及C等位基因頻率顯著高于非退化亞組；
　　 (6) RELN的rs17157128位點基因型分布和等位基因分布在不遵從組和遵從組之間有顯著性差異（x2分別為9.165和4.472，P值

8、分別為0.010和0.034），不遵從亞組AA基因型頻率和A等位基因頻率顯著高于遵從亞組；
　　 (7) DAB1的rs3131735位點的基因型分布在不遵從亞組和遵從亞組間存在顯著性差異(x2＝8.430,P＝0.015)，AG基因型頻率在不遵從組的顯著高于遵從組；
　　 (8) LRP8的rs1288520位點基因型分布和等位基因分布在退化組和非退化組之間有顯著性差異（x2分別為7.790和7.095，P值分別為0.

9、020和0.008），GG基因型頻率和G等位基因頻率在退化亞組顯著高于非退化亞組。
　　 (9) VLDLR的rs1454627位點基因型分布和等位基因分布在退化組和非退化組之間有顯著性差異（x2分別為7.143和4.127，P值分別為0.028和0.042），TT基因型頻率和T等位基因頻率在退化亞組顯著高于非退化亞組；
　　 結論：
　　 (1) RELN可能不是中國漢族兒童孤獨癥的易感基因，其AAGTATCA

10、TGGG單體型和CTTAGCCG單體型反而可能是孤獨癥的保護因素；
　　 (2) DAB1上的GGTTTGGCATTTC單體型與孤獨癥存在顯著的正性關聯(lián)，DAB1可能是中國漢族兒童孤獨癥的易感基因之一；
　　 (3) LRP8、VLDLR、FYN和CDK5的單核甘酸多態(tài)性均與中國漢族兒童孤獨癥無關；
　　 (4) DAB1-RELN- VLDLR基因間交互作用與中國漢族兒童孤獨癥的發(fā)病機制有關；
　　 (

11、5) RELN的rs10487160位點以及rs12666897位點多態(tài)性與孤獨癥患者的“退化”臨床表型有關；
　　 (6) RELN的rs17157128位點多態(tài)性與孤獨癥患者的“不遵從行為”臨床表型有關；
　　 (7) DAB1的rs3131735位點多態(tài)性與孤獨癥患者的“不遵從行為”臨床表型有關；
　　 (8) LPR8的rs1288520位點多態(tài)性與孤獨癥患者的“退化”臨床表型有關；
　　 (9)