Martentoxin調(diào)制神經(jīng)膠質(zhì)瘤型gBK通道的藥理機制研究.pdf

1、人類膠質(zhì)瘤細胞膜高豐度表達鈣激活鉀通道，即gBK通道，與人類BK通道(hbr5)同源性最高，對鈣離子高度敏感性，對膠質(zhì)瘤細胞的增殖與遷移影響巨大。發(fā)掘和鑒定gBK通道的高特異性配體和調(diào)制劑，有益于神經(jīng)膠質(zhì)瘤型gBK通道參與細胞增殖與遷移的病理功能與信號通道機制的研究，并對此相關(guān)疾病藥物的研發(fā)具有重要的理論參考價值和實際運用意義。Martentoxin是自東亞鉗蝎(Buthus martensi Karsch，BmK)蝎毒中純化的一個37

2、肽短鏈毒素，積累的研究資料表明，該毒素可以鈣依賴方式調(diào)控神經(jīng)型BK通道(α+β4)的活性。 本論文利用細胞培養(yǎng)、細胞活力檢測、膜片鉗和熒光成像等方法，研究了martentoxin對神經(jīng)膠質(zhì)瘤型BK通道(gBK)的藥理調(diào)制效應(yīng)及其機制。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)胞內(nèi)液自由鈣濃度分別被控制在150nM、28μM和5mM時，martentoxin可劑量依賴地增強gBK通道活性。當(dāng)胞內(nèi)液中缺失鈣離子時，martentoxin可以顯著地抑制gBK通道活

3、性。分別在上述三種鈣濃度存在下，martentoxin對gBK通道電流的增強比率無顯著性差異，提示了martentoxin對gBK通道的藥理學(xué)效應(yīng)僅取決于內(nèi)鈣的有無，不受內(nèi)鈣濃度高低的影響。保持細胞內(nèi)鈣濃度恒定，給予不同電壓刺激時，martentoxin對gBK通道的增強性藥理調(diào)制效應(yīng)無顯著不同，排除了martentoxin影響到電壓感受器的可能。此外，iberiotoxin與martentoxin的混合藥物施加與iberiotoxin

4、單獨施加對gBK通道活性的調(diào)制效應(yīng)無顯著性差異，表明martentoxin增強gBK通道的作用位點有別于iberiotoxin抑制gBK通道活性的孔區(qū)域，提示了manentoxin可能通過增強人類腦膠質(zhì)瘤U251-MG細胞中g(shù)BK通道的β亞基與α亞基的相互作用提高gBK通道活性。另一方面，經(jīng)MTT實驗表明，與iberiotoxin不同，martentoxin可以劑量依賴性地促進U251-MG細胞的增殖，由此證實gBK通道是martent