基于質(zhì)譜分析技術(shù)的針刺對失眠模型大鼠腦組織蛋白差異表達的研究.pdf

1、目的：利用蛋白質(zhì)組學(xué)方法，通過生物質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定差異蛋白的分子量及蛋白含量，檢索Swiss-Port蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，尋找和甄別與失眠相關(guān)及針刺治療失眠療效相關(guān)的差異蛋白，從蛋白質(zhì)組學(xué)角度探討失眠的病理變化，并為針刺治療失眠的作用機制提供實驗依據(jù)。
　　方法：1.選用清潔級雄性 SD大鼠150只隨機分為五組：空白對照組、正常捆綁對照組、正常針刺治療組、模型對照組、模型針刺治療組。造模方法采用腹腔注射對氯苯丙氨酸混懸液制備大鼠失眠模型

2、。
　　2.失眠模型成功制備后將大鼠斷頭，取出腦組織，分別提取五組大鼠全腦總蛋白，測定其蛋白濃度；采用雙向電泳技術(shù)純化分離出大鼠腦組織內(nèi)的蛋白質(zhì)，然后進行考馬斯亮蘭染色，掃描凝膠圖像并獲取蛋白質(zhì)雙向凝膠電泳圖譜；應(yīng)用2-DE圖譜分析軟件“ImageMaster2D Platinum”對雙向凝膠電泳圖譜進行分析，尋找出五組間差異表達的蛋白質(zhì)；
　　3.借助Mascot2.2軟件檢索相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫從中找出差異蛋白表達點，應(yīng)用基質(zhì)輔

3、助激光解析電離串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOF-MS）測肽質(zhì)量指紋圖，檢索 Swiss-Port數(shù)據(jù)庫，對差異表達的蛋白質(zhì)點進行鑒定，得出鑒定的蛋白質(zhì)結(jié)果。
　　結(jié)果：1.空白對照組與模型對照組比較：消失的蛋白：14-3-3蛋白、去乙?；赋聊畔⒄{(diào)節(jié)因子；表達下調(diào)的蛋白：原肌球蛋白、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶。
　　2.模型針刺治療組與模型對照組比較：新出現(xiàn)的蛋白：14-3-3蛋白、去乙酰化酶沉默信息調(diào)節(jié)

4、因子；表達上調(diào)的蛋白：原肌球蛋白、微管相關(guān)蛋白2激酶、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶。
　　3.空白對照組與正常捆綁對照組比較：消失的蛋白：原肌球蛋白、還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶；新出現(xiàn)的蛋白：微管相關(guān)蛋白2激酶。
　　4.正常捆綁對照組與模型對照組比較：消失的蛋白：14-3-3蛋白、去乙?；赋聊畔⒄{(diào)節(jié)因子；表達下調(diào)的蛋白：微管相關(guān)蛋白2激酶。
　　結(jié)論：1.應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，發(fā)現(xiàn)了與失眠相關(guān)的蛋白質(zhì)，以