針刺太沖穴對(duì)SHR大鼠延髓蛋白差異性表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　在課題組前期研究所發(fā)現(xiàn)太沖、曲泉、沖陽及非穴針刺降壓具有差異性、穴位效應(yīng)具有特異性的基礎(chǔ)上，繼續(xù)選取以上腧穴進(jìn)行針刺干預(yù)，應(yīng)用質(zhì)譜分析及蛋白組學(xué)技術(shù)，研究同樣具有改善眩暈、頭痛癥狀但治療效應(yīng)具有特異性的太沖、曲泉、沖陽針刺干預(yù)后各相應(yīng)SHR大鼠延髓的蛋白表達(dá)差異情況，為闡述針刺降壓效應(yīng)中樞機(jī)制及經(jīng)穴效應(yīng)特異性的中樞機(jī)制研究提供一定的理論線索。
　　方法:
　　選用SPF級(jí)9周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠55只，隨

2、機(jī)分為太沖組、曲泉組、沖陽組、非穴組和模型組，每組11只。選擇9周齡正常雄性Wistar大鼠8只作為正常組。
　　太沖組、沖陽組、曲泉組和非經(jīng)穴組分別針刺雙側(cè)太沖、沖陽、曲泉和非穴各5min。針刺時(shí)使用襪套套住大鼠頭部進(jìn)行固定。在大鼠清醒狀態(tài)下進(jìn)針，行捻轉(zhuǎn)手法，捻轉(zhuǎn)頻率80±10次/min，捻轉(zhuǎn)角度180°±30°。先左后右，兩側(cè)各針刺2.5min，共5min。上午十二時(shí)前完成針刺，每天一次，連續(xù)七天。正常組、模型組大鼠以同樣方法

3、抓握固定5min，不予針刺。
　　第七天針刺結(jié)束后將各組大鼠端頭取腦并分離延髓組織，然后經(jīng)研磨組織、提取蛋白、二維凝膠電泳分離蛋白、掃描圖像、圖像分析等步驟獲得各組差異蛋白點(diǎn)，再用質(zhì)譜儀分析蛋白并從MASCOT數(shù)據(jù)庫中檢索、鑒定出各組的差異蛋白。
　　結(jié)果:
　　(1)用Imagemaste2D5.0軟件對(duì)獲取的二維凝膠電泳圖進(jìn)行分析，以模型組作為參考膠與其他各組結(jié)果進(jìn)行比較，各組大鼠相應(yīng)的延髓表達(dá)差異蛋白點(diǎn)結(jié)果如下:

4、
　　①太沖組大鼠表達(dá)上調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有15個(gè)，下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有11個(gè);
　?、跊_陽組大鼠表達(dá)上調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有34個(gè)，下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有28個(gè);
　?、矍M大鼠表達(dá)上調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有14個(gè)，下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有13個(gè);
　?、芊茄ńM大鼠表達(dá)上調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有33個(gè)，下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有27個(gè)。
　　⑤正常組大鼠表達(dá)上調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有28個(gè)，下調(diào)的差異蛋白點(diǎn)有13個(gè);
　　(2)全部實(shí)驗(yàn)大鼠的差異蛋白

5、質(zhì)點(diǎn)鑒定檢查結(jié)局:各實(shí)驗(yàn)組共得出216個(gè)差異蛋白點(diǎn)，選取表達(dá)差異明顯并剔除重復(fù)點(diǎn)后進(jìn)行蛋白檢索鑒定，各組檢索結(jié)果共得出37個(gè)蛋白，具體如下:
　　①太沖組表達(dá)上調(diào)的有6個(gè):Protein LOC100911959:對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)還有發(fā)育、細(xì)胞周期及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起調(diào)節(jié)作用;Transitional endoplasmic reticulum ATPase:與細(xì)胞凋亡、生長(zhǎng)以及DNA的修復(fù)相關(guān)，在一些腫瘤中也是高表達(dá)并和腫瘤分型、分期、轉(zhuǎn)歸

6、有關(guān);MICOS complex subunit Mic60(Fragment):參加調(diào)節(jié)線粒體，調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)加工效率;Dihydropyrimidinase-related protein3:參加軸突延長(zhǎng)及神經(jīng)元極化形成，參與微管的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié);Cathepsin B:參與溶酶體降解蛋白質(zhì)的過程和免疫反應(yīng)抗原的加工、激素的活化;Peroxiredoxin-2:紅細(xì)胞中主要的過氧化氫清除者，保護(hù)紅細(xì)胞及紅細(xì)胞膜。
　　②沖陽組上調(diào)的有

7、4個(gè):AP-2 complex subunit beta:載脂蛋白亞基，血漿脂蛋白組成部分，參與脂類代謝;Endoplasmin; Triosephosphate isomerase:糖酵解過程中重要的異構(gòu)酶，影響能量的有效生成;失調(diào)可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失調(diào)的多系統(tǒng)疾病;ATPsynthase subunitd，mitochondrial。下調(diào)的蛋白有6個(gè):Succinyl-CoA ligasesubunit beta; Mannose-6-

8、phosphate isomerase; Protein Serpinb6:蛋白酶抑制因子;Eukaryotic translation initiation factor2 subunit1:參與真核細(xì)胞中的蛋白質(zhì)的翻譯，和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有很大關(guān)系;Anamorsin; Protein Plcxd3，參與脂類代謝。
　?、矍M上調(diào)的有4個(gè):Septin-11:參與細(xì)胞胞質(zhì)分裂、細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、凋亡等細(xì)胞生理過程，控制胚胎在發(fā)育

9、過程中相關(guān)的細(xì)胞的遷移;Glutamine synthetase:參與清理體內(nèi)游離銨離子的過程，對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用;Heat shock cognate71 kDaprotein:維持細(xì)胞的生存和功能，提高細(xì)胞的抵抗力，協(xié)同免疫作用;SAPdomain-containing ribonucleoprotein:參與細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝及癌變的重要轉(zhuǎn)錄或翻譯控制。下調(diào)的蛋白有4個(gè):Lamin-B1:影響細(xì)胞增殖、遷移，對(duì)氧化應(yīng)激和信號(hào)通路發(fā)揮影響

10、，在一些癌組織里面呈高表達(dá);cAMP-dependent protein kinase typeⅡ-alpha regulatory subunit:調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)磷酸化;Secernin-1:調(diào)節(jié)細(xì)胞胞吐作用，在一些腫瘤中呈高表達(dá);Septin8(Predicted):參與細(xì)胞內(nèi)功能調(diào)節(jié)，與神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞與神經(jīng)功能障礙等疾病直接相關(guān)。
　?、芊茄ńM上調(diào)的有3個(gè):Heat shock70 kDa protein4:參與熱激響應(yīng)，可能有

11、心肌保護(hù)作用;Alanine--tRNA ligase，cytoplasmic:參與蛋白質(zhì)生物合成過程;Dihydropyrimidinase-related protein。下調(diào)的有2個(gè):Hsp90 co-chaperone Cdc37:參與腫瘤生理與病理的多個(gè)過程;Guanine nucleotide-binding protein G(o)subunit alpha:參與離子通道及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)，一些腫瘤的發(fā)生可能和它的紊亂有很大關(guān)

12、系。
　?、菽Ｐ徒M對(duì)比于正常大鼠，其表達(dá)上調(diào)的蛋白有2個(gè):Glycine--tRNA ligase(Fragment):催化氨基酸與tRNA結(jié)合的特異性酶，參加了基因的表達(dá)控制，可以抑制細(xì)胞凋亡;Spermatid-associated protein:和不孕不育有關(guān)。表達(dá)下調(diào)的有6個(gè):Protein disulfide-isomerase A3:參與細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進(jìn)糖蛋白折疊質(zhì)量控制在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中;Fructose-bispho

13、sphate aldolase C:和一些腫瘤細(xì)胞中起誘導(dǎo)作用的糖代謝酶有關(guān)系;Biliverdin reductase A:參加了細(xì)胞信號(hào)通路的磷酸化的調(diào)節(jié)，影響了代謝的相關(guān)蛋白、凋亡的分子細(xì)胞周期等相關(guān)蛋白、信號(hào)通路的蛋白，免疫分子還有氧化應(yīng)激因子等的基因表達(dá);Inositol monophosphatase1:參加了磷脂酰肌醇信號(hào)的傳遞過程;Phosphoribosyl transferase domain containing1

14、:和殺傷腫瘤細(xì)胞功能相關(guān)。
　　結(jié)論:
　　1.SHR大鼠相較于Wistar大鼠其延髓中參與胰島素代謝及能量代謝的部分相關(guān)蛋白出現(xiàn)表達(dá)差異，結(jié)合其他學(xué)者相關(guān)研究推測(cè)血壓變化可能與能量代謝異常有相關(guān)性;SHR大鼠可能比正常大鼠更易患免疫功能缺陷相關(guān)疾病。
　　2.針刺太沖穴的降壓效應(yīng)中樞機(jī)制可能與延髓中參與能量代謝部分相關(guān)蛋白密切相關(guān);針刺沖陽穴可導(dǎo)致延髓中參與影響脂類代謝部分相關(guān)蛋白表達(dá)差異，與其具有胃經(jīng)調(diào)節(jié)生物體水谷