順鉑誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞株BGC-823耐藥過(guò)程中hMLH1、hMSH2蛋白表達(dá)的變化.pdf

1、該研究以自建的人胃癌順鉑耐藥細(xì)胞株BGC-823/cDDP為載體,檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞株的生物學(xué)行為變化及耐藥性的產(chǎn)生情況和誘導(dǎo)前后腫瘤細(xì)胞肺耐藥蛋白(lung resistance protein,LRP)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π(glutathione-S-transferase-π,GST-π)及錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1、hMSH2的表達(dá),初步探討耐藥性產(chǎn)生與錯(cuò)配修復(fù)基因產(chǎn)物表達(dá)的關(guān)系,以期證明細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)基因功能喪失是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性

2、的機(jī)制之一,希望能為逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性提供一些幫助.方法:1.BGC-823/cDDP耐藥細(xì)胞株的建立及耐藥前后生物學(xué)行為的觀察.采用逐步遞增順鉑(Cisplatin,cDDP)濃度、間歇作用體外誘導(dǎo)法,建立人胃癌順鉑耐藥細(xì)胞株BGC-823/cDDP;MTT法檢測(cè)新建耐藥株的耐藥指數(shù)及交叉耐藥性;倒置顯微鏡下觀察親本細(xì)胞株和耐藥細(xì)胞株在藥物作用后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異;通過(guò)細(xì)胞群體倍增時(shí)間、細(xì)胞周期分布及染色體核型分析等方法觀察耐藥前后細(xì)胞的生

3、物學(xué)特征變化,以確定耐藥株的建立.2.檢測(cè)與多藥耐藥相關(guān)的蛋白及錯(cuò)配修復(fù)蛋白.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)多藥耐藥相關(guān)的蛋白LRP、GST-π及錯(cuò)配修復(fù)蛋白hMLH1、hMSH2的表達(dá);蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)錯(cuò)配修復(fù)蛋白hMLH1、hMSH2的表達(dá),比較細(xì)胞株耐藥產(chǎn)生前后上述蛋白表達(dá)的變化,探討這些蛋白在人胃癌細(xì)胞株BGC-823對(duì)順鉑產(chǎn)生耐受過(guò)程中的作用.結(jié)論:1.利用逐步遞增藥物濃度、間歇作用體外誘導(dǎo)法從人胃癌細(xì)胞株BGC-823誘導(dǎo)出耐藥細(xì)胞

4、株BGC-823/cDDP,耐藥指數(shù)為3.93.耐藥株BGC-823/cDDP細(xì)胞的生物學(xué)特性與親本株BGC-823細(xì)胞相比存在差異,細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)有差異且增殖減慢、染色體數(shù)目的分布離散.2.BGC-823/cDDP細(xì)胞LRP及GST-π的表達(dá)均強(qiáng)于BGC-823細(xì)胞,說(shuō)明順鉑誘導(dǎo)后的BGC-823/cDDP細(xì)胞已產(chǎn)生了耐藥性.3.與BGC-823細(xì)胞相比耐藥株BGC-823/cDDP細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1表達(dá)無(wú)顯著性差異,但hMS