慢性應(yīng)激和抗抑郁劑對大鼠海馬中CAMPK-Ⅱ表達的影響.pdf

1、前言：抑郁癥是一種最常見的精神疾病，具有較高的復(fù)發(fā)率和終生患病率。神經(jīng)影像學(xué)和尸檢研究中越來越多的證據(jù)表明，嚴重情感障礙與神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)可塑性和細胞順應(yīng)性的損害相關(guān)。海馬神經(jīng)元損傷是神經(jīng)系統(tǒng)可塑性調(diào)節(jié)中的一個重要環(huán)節(jié)，在研究抑郁癥病因和發(fā)病機制中占有重要地位。慢性應(yīng)激可引起大腦器質(zhì)性損害，尤其是海馬結(jié)構(gòu)和功能的損害，最終誘發(fā)抑郁癥。鈣離子/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ(CaMPKⅡ)與神經(jīng)元突出可塑性密切相關(guān)。因此本研究參照文獻，使大鼠連續(xù)三

2、周處于應(yīng)激狀態(tài)，制作成抑郁癥模型。同時給予大鼠不同的藥物干預(yù)，揭示慢性應(yīng)激、抗抑郁藥物、CaMPKⅡ、海馬神經(jīng)元可塑性和抑郁癥之間的關(guān)系。 實驗材料1.實驗動物采用青年雄性Wistar大鼠40只，體重180～220克，由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。 2.主要試劑小鼠抗大鼠α-CAMPKⅡ單克隆抗體(Chemicon)；羊抗小鼠免疫球蛋白抗體(北京中山公司) 3.實驗儀器YSD-4G型藥理生理實驗多用儀；電泳槽(

3、BIO-RAD，U.S.A)；電泳儀、轉(zhuǎn)印儀(北京六一儀器廠)；實時圖象分析系統(tǒng)(OLYM-PUS，Japan)。 實驗方法1.動物分組依Open-field法評分將大鼠隨機分為對照組、抑郁癥組、鋰鹽組和噻奈普汀組，每組各10只。 2.動物抑郁癥模型制作第1～21天實驗組大鼠每天隨機接受不同的刺激。第22天所有大鼠再次采用Open-field法評定行為。然后殺死動物。 3.藥物干預(yù)每天給應(yīng)激前用灌胃針給大鼠灌藥。

4、具體見下表。┏━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━┳━━━━━━━┓┃對照組┃抑郁癥組┃鋰鹽組┃噻奈普汀組┃┃(10只)┃(10只)┃(10只)┃(10只)┃┣━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━━━┫┃處置生理鹽水┃應(yīng)激+生理鹽水┃應(yīng)激+鋰鹽┃應(yīng)激+噻奈普汀┃┗━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━┻━━━━━━━┛4.檢測α-CaMPKⅡ的表達第22天將動物全部斷頭處死，于一分鐘之內(nèi)取出鼠腦海馬組織經(jīng)We

5、sternBlot法測定海馬組α-CaMPKⅡ表達。 實驗結(jié)果1.體重和開場行為評定：經(jīng)過21天應(yīng)激之后，和對照組相比抑郁癥組大鼠中央格停留時間明顯延長，水平穿越格數(shù)明顯減少，直立次數(shù)明顯減少，糞便粒數(shù)增多，修飾次數(shù)減少，體重明顯減少。 而鋰鹽組和噻奈普汀組在LiCO3和噻奈普汀的干預(yù)下，在中央格停留時間，水平穿越格數(shù)，直立次數(shù)和修飾次數(shù)上的表現(xiàn)都要優(yōu)于抑郁癥組。2.海馬CAMPK-Ⅱ的表達：經(jīng)過21天的應(yīng)激，抑郁癥組和

6、鋰鹽組的CAMPK-Ⅱ的表達比對照組明顯減少。而噻奈普汀組的表達和對照組沒有差異。另外，鋰鹽組的表達要少于抑郁癥組。 討論本實驗利用慢性不可預(yù)見性綜合應(yīng)激刺激，造成實驗組動物抑郁狀態(tài)。從開場行為評定結(jié)果來看，經(jīng)過21天的慢性綜合應(yīng)激，實驗組動物平均體重低于對照組，活動明顯減少，說明大鼠抑郁模型的制作是成功的。 近十年來，抑郁癥的研究焦點都集中海馬神經(jīng)元順應(yīng)性和可塑性上。 CAMPKⅡ是一種影響神經(jīng)元可塑性的關(guān)鍵物

7、質(zhì)。大量的動物模型研究告訴我們，α-CaMPKⅡ是作用于大腦和其他組織的各種有害刺激的早期的敏感標記物，也是各種抗抑郁藥物作用的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 α-CaMPKⅡ的主要底物有突觸后的AMPA和Map2。在突觸后神經(jīng)元，活化的α-CaMPKⅡ能促使AMPA受體表達增加并移位到突觸后膜，進一步影響突觸的可塑性。另一條通路是Map2，α-CaMPKⅡ能磷酸化Map2，后者通過微管蛋白連接區(qū)與微管相互作用，影響突觸的可塑性。噻奈普汀作為一種特

8、殊的抗抑郁藥，主要是通過改善突觸可塑性來發(fā)揮抗抑郁作用。本實驗中觀察到噻奈普汀組大鼠α-CaMPKⅡ的表達增加，提示噻奈普汀可能通過上調(diào)α-CaMPKⅡ來發(fā)揮抗抑郁作用。而鋰鹽組大鼠α-CaMPKⅡ的表達減少，提示可能是鋰鹽減少了α-CaMPKⅡ的表達。 結(jié)論1.慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激能降低大鼠的體重，抑制探究行為和修飾行為，并使α-CaMPKⅡ的表達明顯減少。 2.α-CaMPKⅡ能改善海馬神經(jīng)元的可塑性，噻奈普汀可能