重組MTSase和MTHase雙酶法轉(zhuǎn)化淀粉生產(chǎn)海藻糖.pdf_第1頁(yè)
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1、本文從嗜熱硫礦硫化葉菌(Sulfolobussolfataricus)ATCC35092的基因組中用PCR方法擴(kuò)增得到編碼麥芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麥芽寡糖基海藻糖海藻糖水解酶(MTHase)的基因，成功地構(gòu)建了重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)(pTrc99a-MTSase)和E.coliBL21(DE3)(pTrc99a-MTHase)，經(jīng)過培養(yǎng)和誘導(dǎo)優(yōu)化后，MTSase和MTHase酶活產(chǎn)率分別達(dá)到了31.3

2、U·g(wetcell)-1和403.0U·g(wetcell)-1。 考慮到S.solfataricusMTSase基因與大腸桿菌的密碼子偏愛性上的差別，將MTSase基因5’和3’端的稀有密碼子替換為大腸桿菌偏愛密碼子，并優(yōu)化mRNA翻譯起始區(qū)域二級(jí)結(jié)構(gòu)，同時(shí)以強(qiáng)翻譯終止序列UAAU代替UAG，使MTSase表達(dá)水平提高到55.0U·g(wetcell)-1。 重組菌誘導(dǎo)培養(yǎng)后，將破胞液經(jīng)熱處理后直接作為粗酶液作用于

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