免疫分析法在食品有害殘留的檢測(cè)和新藥篩選中的應(yīng)用研究.pdf

1、免疫分析法(Immunoassay)是一類較為新型、以抗原.抗體特異反應(yīng)為基礎(chǔ)的快速篩選分析方法。該法靈敏度較高，特異性強(qiáng)，與儀器法相比，無(wú)需昂貴的儀器和專業(yè)分析人員，樣品處理過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單，因此檢測(cè)花費(fèi)較低，而且檢測(cè)快速，檢測(cè)儀器較為簡(jiǎn)單便宜，有的儀器較小，方便攜帶。目前免疫分析法已廣泛應(yīng)用于獸藥殘留或其它食品中有害殘留的快速現(xiàn)場(chǎng)篩選試驗(yàn)。
　　 本研究將從新方法和新應(yīng)用兩方面探討免疫分析法在食品有害殘留和新藥篩選領(lǐng)域的應(yīng)用前景

2、。
　　 在現(xiàn)有的食品有害殘留快速檢測(cè)的報(bào)道中，免疫分析法多為非均相反應(yīng)體系，為了將標(biāo)記的抗原/抗體與游離抗原/抗體分離，操作過(guò)程中固定相需要多次洗滌，溶劑使用量較多、耗時(shí)較長(zhǎng)，本研究將建立一種均相的熒光偏振免疫分析方法(Fluorescence polarization immunoassay，F(xiàn)PIA)，該法是一種快速簡(jiǎn)便高效的分析方法，無(wú)需昂貴復(fù)雜的儀器，測(cè)定時(shí)間很短，數(shù)分鐘即可完成檢測(cè)。
　　 本研究以喹諾酮類藥

3、物，沙拉沙星為檢測(cè)藥物，利用異硫氰酸熒光素標(biāo)記沙拉沙星合成熒光標(biāo)記物，采用薄層色譜法提純，優(yōu)化了反應(yīng)時(shí)間、標(biāo)記物和抗體的工作濃度，建立了沙拉沙星的快速熒光偏振免疫分析檢測(cè)法。經(jīng)檢測(cè)，該方法測(cè)定沙拉沙星在緩沖液中的半數(shù)抑制濃度(IC50)為43.23 ng/mL，檢測(cè)范圍為5.7～327.6 ng/mL，可以達(dá)到國(guó)家規(guī)定的動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量(80μg/kg)的要求。同時(shí)本研究考察了FPIA測(cè)定沙拉沙星時(shí)檢測(cè)值的穩(wěn)定性與孵育時(shí)間的

4、關(guān)系，以及沙拉沙星對(duì)其它4種喹諾酮類藥物的交叉反應(yīng)。結(jié)果顯示：此法測(cè)得沙拉沙星抗體與環(huán)丙沙星、恩諾沙星、加替沙星、氧氟沙星的交叉反應(yīng)率分別為3.3％，1.8％，1.7％，0.7％。在牛奶和豬尿中沙拉沙星的回收率分別在71％～94％、74％～102％之間。該法操作簡(jiǎn)單快捷，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需5 min，為動(dòng)物性食品中沙拉沙星殘留的快速篩選檢測(cè)提供了一種準(zhǔn)確、高效的選擇。
　　 另外，本研究將利用表觀遺傳學(xué)過(guò)程建立免疫分析法，檢測(cè)甲基

5、轉(zhuǎn)移酶活性，目的是應(yīng)用于新藥篩選。本研究將針對(duì)甲基轉(zhuǎn)移酶催化的S-腺苷甲硫氨酸(SAM)-S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAH)反應(yīng)，測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物和起始物的濃度變化來(lái)檢測(cè)各種分子對(duì)甲基化轉(zhuǎn)移酶活性的影響，從而建立一種可以用來(lái)高通量篩選潛在藥物的手段。目前S-腺苷-L-高半胱氨酸濃度的檢測(cè)方法較少，其中比色法主要缺點(diǎn)是步驟繁瑣費(fèi)時(shí)，而免疫分析法則操作簡(jiǎn)單快速，成本較低。本研究合成并鑒定了S-腺苷-L-高半胱氨酸的多種免疫原和包被原，為檢測(cè)S-