微囊蛋白在小鼠膽囊膽固醇結(jié)石癥形成中的作用.pdf

1、目的:研究微囊蛋白在致石飼料誘導(dǎo)的小鼠膽囊膽固醇結(jié)石癥形成中的作用，為臨床膽囊膽固醇結(jié)石癥的診療提供新的思路。
　　方法:以結(jié)石易感小鼠C57BL/6小鼠為研究對象，分別給予普通飼料和含高脂高膽固醇致石飼料飼養(yǎng)4周。4％水合氯醛腹腔注射，待小鼠麻醉后，進(jìn)行小鼠外科實(shí)驗(yàn)。依次剪開皮膚、皮下筋膜、腹膜，充分暴露肝膽組織，肉眼觀察小鼠肝臟、膽囊外觀及膽囊結(jié)石形成情況。結(jié)扎膽囊管及膽總管下端，在膽總管插入PE10號管1h留取膽汁-20℃保

2、存。下腔靜脈采血于含EDTA的生化管中，3000rpm4℃離心15min收集上層血清4℃保存。最后切取肝臟和膽囊組織，肝臟稱重，肝膽組織保存于-80℃冰箱。全自動生化分析儀檢測血脂及膽汁成分。RT-PCR及Westren blot分別檢測小鼠肝臟及膽囊CAV1、CAV3、SR-B1、CCK-AR的基因和蛋白水平。
　　結(jié)果:致石飼料飼養(yǎng)4周后，實(shí)驗(yàn)組小鼠膽囊增大，膽囊內(nèi)可見大量泥沙狀膽固醇結(jié)石沉積，成石率為100％(6/6)，而普

3、通飼料飼養(yǎng)的對照組小鼠膽囊略小，均未發(fā)現(xiàn)有結(jié)石。實(shí)驗(yàn)組小鼠肝體重比顯著增加（0.08±0.01 vs0.05±0.01，P＜0.01），肝臟外觀較灰暗、腫大，而普通飼料飲食的對照組小鼠肝臟色澤紅潤，體積較小。實(shí)驗(yàn)組小鼠膽汁渾濁，膽固醇和磷脂含量較對照組明顯升高（1.33±0.33 vs0.21±0.11，P＜0.01;3.55±1.40 vs1.55±0.63，P＜0.05），而總膽汁酸含量卻顯著下降(726.48±51.83 vs83

4、9.83±23.75，P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組小鼠血清總膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量明顯高于對照組(TC:4.22±0.46 vs2.21±0.11，P＜0.01;HDL:1.86±0.10 vs1.35±0.11，P＜0.01;LDL:2.18±0.44 vs0.58±0.12，P＜0.01)，甘油三酯、極低密度脂蛋白(水平未有明顯改變(TG:0.75±0.04 vs0.83±0.15，VLDL:0.18±0.12 vs0.2

5、8±0.09)。與對照組小鼠相比，實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟和膽囊CAV1mRNA和蛋白表達(dá)均顯著下降（肝臟CAV1基因和蛋白分別為0.53±0.13 vs1±0.32，P＜0.01;0.39±0.07 vs0.92±0.06，P＜0.01;膽囊CAV1基因和蛋白分別為0.4±0.22 vs1±0.22，P＜0.01;1.04±0.07 vs1.34±0.04，P＜0.01），膽囊CCKAR基因和蛋白水平亦明顯降低(0.32±0.20 vs1±0.

6、25，P＜0.01;0.07±0.02 vs0.35±0.04，P＜0.01)，兩組小鼠肝臟均未能檢測到CCK-AR的表達(dá)。肝臟CAV3 mRNA和蛋白表達(dá)增加（肝臟CAV3基因和蛋白分別為3.38±1.47 vs1±0.17，P＜0.01;0.93±0.04 vs0.5±0.06，P＜0.01)，膽囊CAV3 mRNA水平改變沒有統(tǒng)計學(xué)意義（0.87±0.27 vs1±0.40），蛋白水平顯著升高（0.25±0.03 vs0.17±0

7、.02，P＜0.05）;SR-B1基因和蛋白均未有明顯改變（肝臟基因和蛋白分別為0.25±0.03 vs0.17±0.02，0.9±0.04 vs0.92±0.04;膽囊基因和蛋白分別為0.86±0.27 vs1±0.35，0.89±0.03 vs1.04±0.07）。
　　結(jié)論:含高脂高膽固醇高膽酸的致石餐作為一外界干預(yù)因素，能誘導(dǎo)小鼠血脂含量升高，膽道膽固醇高分泌，總膽汁酸合成減少，促使小鼠膽囊膽固醇結(jié)石形成。小鼠膽囊膽固醇結(jié)

8、石產(chǎn)生伴隨CAV1和CAV3在肝膽組織基因和蛋白表達(dá)水平發(fā)生變化，提示CAV1及CAV3可能與膽囊膽固醇結(jié)石的形成有關(guān)。SR-B1可能對C57BL/6小鼠膽囊膽固醇結(jié)石的形成無顯著影響。CAV1在肝膽組織表達(dá)下降，可能造成膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)功能受損，脂質(zhì)代謝紊亂，膽固醇在肝細(xì)胞內(nèi)大量堆積。CAV3可能通過抑制膽囊CCKAR的表達(dá)，減弱膽囊平滑肌的收縮，膽囊動力低下，膽汁淤滯，促進(jìn)膽固醇結(jié)晶析出，聚集以及結(jié)石形成。CAV1、CAV3有望成為臨床膽