膽囊膽固醇沉著癥的發(fā)病機制及相關(guān)干預(yù)研究.pdf

1、目的：膽囊膽固醇沉著癥是因粘膜層及粘膜下層中過量的脂滴積聚所致。對于彌漫性膽固醇沉著癥，本實驗的目的就是判定吡格列酮（過氧化物酶增殖體活化受體-γ的激動劑）可否降低膽固醇沉著癥膽囊上皮細胞中膽固醇酯的含量及其作用機理，以及吡格列酮與細胞自身的調(diào)控因子肝X受體α能否協(xié)同降低膽固醇沉著癥膽囊上皮細胞中脂滴含量，進而達到治療的目的。對于膽囊膽固醇息肉，既要達到切除息肉的目的，又要保留膽囊，以維持其生理功能才是最合理的手術(shù)方式。本實驗同時建立了

2、腹腔鏡內(nèi)鏡雙鏡聯(lián)合技術(shù)切除息肉保留膽囊的可行性，并進行了保留膽囊后膽囊功能的短期隨訪。
　　方法：病人來源于東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院普外科，已通過倫理學(xué)驗證。手術(shù)中取得的膽囊標本，切取粘膜層的一半，行膽囊粘膜上皮細胞原代培養(yǎng)，三天后經(jīng)吡格列酮（過氧化物酶增殖體活化γ受體激動劑），22(R)-羥基膽固醇（肝X受體α激動劑），或者過氧化物酶增殖體活化受體-γ小RNA的干預(yù)后，再使用Western蛋白質(zhì)印跡法檢測細胞中過氧化物酶增殖體活化受

3、體-γ，肝X受體α，ATP-結(jié)合盒載體蛋白A1，中性膽固醇酯水解酶蛋白1蛋白含量的變化;并采用熒光定量的方法測量干預(yù)過程中細胞內(nèi)游離膽固醇外流量的變化，最后通過油紅O染色的方法直觀的觀察細胞中脂滴含量的變化。在臨床研究方面，選取中大醫(yī)院普外科的60例膽囊膽固醇息肉患者，術(shù)前常規(guī)B超檢查，采用全身麻醉，腹腔鏡下切開膽囊底部，微波熱凝膽囊息肉的根部，活檢鉗取出體外。對所有的病人常規(guī)進行隨訪，術(shù)后第1、3、6個月采用B超檢測保留膽囊的容積和收

4、縮功能。
　　結(jié)果：在膽囊上皮細胞培養(yǎng)中，1μ M的吡格列酮明顯的提高了中性膽固醇酯水解酶1和ATP-結(jié)合盒載體蛋白A1的表達量。在過氧化物酶增殖體活化受體-γ小RNA的作用下，膽囊上皮細胞內(nèi)中性膽固醇酯水解酶1和ATP-結(jié)合盒載體A1的蛋白含量分別下降到處理前的22.15％和23.62％;但是，10μM22(R)-羥基膽固醇加入到經(jīng)過氧化物酶增殖體活化受體-γ小RNA干擾后的膽囊上皮細胞后，ATP-結(jié)合盒載體A1蛋白含量增加了1

5、.77倍，而中性膽固醇酯水解酶1的蛋白含量沒有明顯的變化。在用吡格列酮處理過的膽囊上皮細胞，膽固醇外流量隨著吡格列酮濃度的增加或作用時間的延長而外流量明顯增加。為了判斷細胞自身膽固醇內(nèi)環(huán)境調(diào)節(jié)因子肝X受體α對吡格列酮的影響，我們采用22(R)-羥基膽固醇聯(lián)合吡格列酮干預(yù)的方式，發(fā)現(xiàn)二者共同上調(diào)3.64倍ATP-結(jié)合盒載體A1蛋白表達量，同時大幅度提高細胞外排游離膽固醇的能力。油紅O染色也顯示了二者聯(lián)合應(yīng)用可以更加明顯的降低膽固醇沉著癥患

6、者膽囊上皮細胞中脂滴的含量。在臨床病例研究中，所有的手術(shù)過程是成功的，手術(shù)時間60～135分鐘。
　　結(jié)論：(1)吡格列酮經(jīng)“過氧化物酶增殖體活化γ受體-肝X受體α-ATP-結(jié)合盒載體A1”通路提高ATP-結(jié)合盒載體A1的表達;而增加中性膽固醇酯水解酶1的含量和肝X受體α沒有明顯的關(guān)系。(2)吡格列酮通過增加膽囊上皮細胞中ATP-結(jié)合盒載體蛋白A1和中性膽固醇酯水解酶1的表達量，提高了膽固醇酯水解和游離膽固醇外流的能力，進而達到降