肢帶型肌營養(yǎng)不良癥2A型的診斷方法及臨床特點研究.pdf

1、肢帶型肌營養(yǎng)不良癥(limb-girdlemusculardystrophy,LGMD)是一組以四肢近端肌無力為主要臨床表現(xiàn)、具有遺傳異質(zhì)性的肌肉疾病,依據(jù)遺傳方式的不同可分為常染色體顯性遺傳(LGMD1型)及常染色體隱性遺傳(LGMD2型)兩大類,目前報道共21種。在世界的大部分地區(qū),LGMD2型中發(fā)病率最高的是LGMD2A,此類肌營養(yǎng)不良癥起病于青少年,單憑臨床癥狀很難鑒別,必須依賴分子學(xué)或蛋白質(zhì)組學(xué)研究手段方能確診。
　　肢

2、帶型肌營養(yǎng)不良2A型(LGMD2A)是由鈣依賴的中性半胱氨酸蛋白酶calpain-3病變所引起的一種肌肉發(fā)育不良疾病,在中國人群中尚無相關(guān)報道。其致病基因CAPN3位于15q15.1-q21.1,是一個包含24個外顯子的基因片段,目前還沒有發(fā)現(xiàn)突變熱點,從而使分子診斷顯得相對困難且耗費巨大。Calpain-3存在于骨骼肌肌細胞中,肌肉活檢組織行免疫組化染色后深染部分均在胞漿中,不利于分析和比較。而選擇免疫印跡法檢測calpain-3蛋白

3、的表達,費用相對較低,且可對該蛋白進行半定量檢測,從而建立LGMD2A的診斷。再回顧并分析此類患者的資料,以發(fā)現(xiàn)其共有的臨床特點及病理表現(xiàn)。
　　為研究中國人群中LGMD2A患者的臨床及病理特點,本文共劃分為兩大部分。第一部分內(nèi)容主要為采用聯(lián)合免疫印跡法診斷LGMD2A:從我科2006年～2010年間建立的肌肉標本庫中依據(jù)一定的入選條件選擇93例肌肉樣本:行免疫組化染色。為除外dysferlin蛋白病變繼發(fā)calpain-3缺失,

4、故采用聯(lián)合免疫印跡法同時檢測Calpain-3及dysferlin蛋白表達情況。在93例入選患者中,18例患者肌肉樣本中calpain-3表達完全缺失(13例)或明顯降低(5例),但dysferlin表達完好或輕度減少,故診斷為calpainopathy(LGMD2A)。36例患者在免疫印跡檢測中發(fā)現(xiàn)dysferlin蛋白存在“顯著減少”或“完全缺失”,而同時他們的calpain-3表達完好或輕度減少,故診斷為dysferlinopat

5、hy,其中30例為LGMD2B。在擬診為“肢帶型肌營養(yǎng)不良癥”的63例患者中,依據(jù)免疫印跡診斷結(jié)果,經(jīng)典型LGMD2A占所有肢帶型肌營養(yǎng)不良的29.0％(17/63),剩余1例不典型的LGMD2A患者表現(xiàn)為遠端肌無力,而LGMD2B占47.6％(30/63)。第二部分內(nèi)容為回顧并分析18例LGMD2A患者的臨床及病理特點:男女比例為1∶1,平均發(fā)病年齡為18.8歲,其伸髖肌力較其它組肌群明顯降低,與肌肉核磁共振(MRI)結(jié)果相匹配;其中

6、14例(77.8％)伴隨雙側(cè)翼狀肩(12例對稱,2例不對稱);12例(66.7％)伴隨跟腱攣縮,其中1例還合并雙側(cè)肘關(guān)節(jié)攣縮。LGMD2A患者的病理結(jié)果顯示:所有標本均呈“肌營養(yǎng)不良樣”改變,12例(66.7％)肌肉切片中發(fā)現(xiàn)“分葉狀纖維”,8例(55.6％)存在“輪狀纖維”。
　　本研究首次在國內(nèi)探索聯(lián)合免疫印跡法在LGMD2A型和2B型診斷中的應(yīng)用,討論此方法與其它診斷方法相比存在的優(yōu)勢。旨在初步揭示中國人群LGMD2A型患者