應(yīng)用組織芯片技術(shù)研究肺癌中Ets1 mRNA表達(dá)的生物學(xué)意義和相關(guān)分子機(jī)制.pdf

1、第一部分細(xì)胞芯片研究初探 目的：進(jìn)行細(xì)胞芯片的研制，為快速、規(guī)范、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)地進(jìn)行各項(xiàng)細(xì)胞學(xué)臨床和科研工作提供一種新的技術(shù)方法。 材料與方法：設(shè)計(jì)7×16點(diǎn)陣，運(yùn)用自制的細(xì)胞陣列檢測(cè)裝置(專利申請(qǐng)?zhí)枺?005200278140)，選取含有腫瘤細(xì)胞的肺癌患者的胸水50例、非腫瘤患者胸水6例，經(jīng)離心等處理后，用微量移液器點(diǎn)入陣列相應(yīng)位置，每例2個(gè)點(diǎn)，即制成細(xì)胞芯片。經(jīng)固定后進(jìn)行HE、免疫組化或熒光原位雜交等檢測(cè)，檢驗(yàn)結(jié)果與每

2、例常規(guī)涂片進(jìn)行對(duì)比。同時(shí)對(duì)該細(xì)胞芯片的研究結(jié)果與中晚期肺癌的組織芯片的研究結(jié)果進(jìn)行比較，應(yīng)用四格表x2檢驗(yàn)作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α值規(guī)定為0.05。 結(jié)果：1細(xì)胞芯片HE染色結(jié)果制成的細(xì)胞芯片為112點(diǎn)，7×16點(diǎn)陣，點(diǎn)陣排列整齊，分布均勻，無掉片。將HE染色的細(xì)胞芯片各點(diǎn)進(jìn)行顯微鏡下觀察，檢測(cè)結(jié)果與同時(shí)制作的相應(yīng)涂片進(jìn)行比較，結(jié)果完全一致。50例肺癌標(biāo)本均可見腫瘤細(xì)胞。 2細(xì)胞芯片熒光原位雜交結(jié)果對(duì)細(xì)胞芯片進(jìn)行了Ets

3、1mRNA熒光原位雜交檢測(cè)，熒光顯微鏡下觀察：熒光清晰，背景干凈，腫瘤細(xì)胞胞漿呈黃綠色熒光，而細(xì)胞核無熒光顯示。所得陽性結(jié)果與各例相應(yīng)涂片檢測(cè)結(jié)果一致。 將細(xì)胞芯片檢測(cè)結(jié)果與進(jìn)行Ets1mRNA熒光原位雜交的Ⅲ+Ⅳ期肺癌的組織芯片陽性率進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3細(xì)胞芯片免疫組化染色結(jié)果對(duì)細(xì)胞芯片進(jìn)行了c-Met免疫組化染色后，細(xì)胞無明顯減少，所得陽性結(jié)果與各例相應(yīng)涂片檢測(cè)結(jié)果完全一致。 將細(xì)

4、胞芯片檢測(cè)結(jié)果與進(jìn)行c-Met免疫組化染色的Ⅲ+Ⅳ期肺癌的組織芯片陽性率進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 2結(jié)論：1細(xì)胞芯片可以替代細(xì)胞涂片進(jìn)行臨床診斷和科學(xué)研究，尤其在樣本較多的情況下更顯示其優(yōu)越性。 2細(xì)胞芯片有望用于胸水、腹水、尿液、心包積液、腦脊液、痰以及培養(yǎng)細(xì)胞等細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，具有診斷快速準(zhǔn)確、特異性高、信息量大的特點(diǎn)，在臨床診斷、科研和流行病學(xué)篩查中有廣泛的應(yīng)用前景。 3本研究制作細(xì)胞芯片操

5、作簡(jiǎn)單；細(xì)胞標(biāo)本取來就可以開始操作，用時(shí)短；可以實(shí)現(xiàn)不同批次的標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行免疫組化或原位雜交等檢測(cè)，可以節(jié)約試劑及實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)條件的標(biāo)準(zhǔn)化，減少系統(tǒng)誤差。 4將培養(yǎng)的細(xì)胞制作成細(xì)胞芯片，用于高通量地研究基因或蛋白質(zhì)表達(dá)的差異、試驗(yàn)藥物的敏感性、毒性試驗(yàn)以及轉(zhuǎn)染目的基因克隆的篩選等領(lǐng)域有望發(fā)揮巨大的作用。 5細(xì)胞芯片也有它的不足之處，如細(xì)胞陣列不能提供組織學(xué)結(jié)構(gòu)的信息，與組織芯片配合使用將在科學(xué)研究中發(fā)揮更大的作用。