細胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)檢測環(huán)境致癌物的應(yīng)用研究.pdf

1、人類日常生活環(huán)境中存在著大量的化學和生物性致癌因子，這些致癌因子之間往往存在著多種形式的相互作用。腫瘤的發(fā)生是一種宿主與環(huán)境之間復(fù)雜的、動態(tài)的相互作用過程，由于人類接觸致癌物有顯著的時間差異，所以體外實驗研究就成為可疑物質(zhì)致癌作用的有效評價方式。細胞轉(zhuǎn)化檢測技術(shù)是一種有效的篩查致癌物的體外檢測方法，能夠高度模擬致癌物在動物體內(nèi)的致癌過程，比一般的體外檢測系統(tǒng)敏感，是目前體外實驗檢測環(huán)境遺傳毒物最為可靠的方法。 本文采用細胞轉(zhuǎn)化實

2、驗、軟瓊脂克隆實驗以及小鼠體內(nèi)致瘤等生物學技術(shù)，針對環(huán)境中常見的致癌物——MC-LR、苯并[a]芘、1，3-硝基苯并芘以及苯并芘代謝物的致癌性進行了深入的探討，并將該實驗系統(tǒng)應(yīng)用于淮河流域污染水源的分析，從細胞生物學角度評價了淮河流域污染水源對人體的潛在致癌性。首先通過體外細胞轉(zhuǎn)化實驗，以轉(zhuǎn)染了5型腺病毒DNA的人胚腎永生化細胞(293細胞系)作為靶細胞詳細研究MC-LR、苯并[a]芘等的致癌作用。通過細胞毒性實驗篩選出MC-LR、苯并

3、[a]芘等物質(zhì)適宜進行細胞轉(zhuǎn)化的濃度實驗。實驗首先將待測物質(zhì)與細胞共同作用培養(yǎng)一段時間后，通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)學及其生長接觸抑制特性的改變，然后通過血清依賴性實驗檢測細胞生長特性的變化，初步確定293細胞在致癌物的誘導(dǎo)作用下發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化。之后將轉(zhuǎn)化后的293細胞分別進行軟瓊脂克隆培養(yǎng)和小鼠體內(nèi)致瘤實驗，檢驗其是否能在軟瓊脂中錨著獨立生長形成克隆并在免疫缺陷小鼠體內(nèi)浸潤生長形成腫瘤，進一步明確MC-LR、苯并[a]芘等對293細胞惡性

4、轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)作用，從而檢測其致癌性。采用小于MC-LR最小致癌劑量的濃度與TPA共同作用于293，檢測MC—LR與TPA的協(xié)同致癌作用。在對純毒素進行研究的基礎(chǔ)上，采用體外細胞轉(zhuǎn)化系統(tǒng)對淮河流域受污染的水樣進行檢測，從細胞生物學的角度評價污染水樣的潛在致癌性。分別于消化道腫瘤高發(fā)的河南省沈丘縣淮河支流沙穎河源頭兩個農(nóng)戶家中的井水以及蔡河魏橋采集水樣。通過過濾、色譜柱濃縮等實驗方法得到水樣的濃縮液，采用細胞轉(zhuǎn)化實驗、軟瓊脂克隆實驗以及血清依