維生素D對煙草致癌物誘發(fā)肺癌發(fā)生影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討維生素D對煙草致癌物誘發(fā)肺癌發(fā)生的影響
　　方法：
　　1采取灌胃的方式給予Balb/c小鼠補充維生素D。維生素D以無水乙醇作為溶劑，最終乙醇濃度為5％。實驗分為空白組（補充5%的乙醇溶劑）、10IU維生素D組（補充維生素D10IU/kg/d）、20IU維生素D組（補充維生素D20IU/kg/d）、40IU維生素D組（補充維生素D40IU/kg/d）。4周后，化學發(fā)光法檢測血清維生素D。
　　2免

2、疫組化檢測骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（BMP-2）和環(huán)氧合酶2（COX-2）在人體肺癌和癌旁組織中的表達。
　　3用NNK100mg/kg一次腹腔注射A/J小鼠建立肺癌模型。NNK以生理鹽水為溶劑。維生素D以無水乙醇作為溶劑，最終乙醇濃度為5%。在注射NNK前一周開始給予不同干預，直到實驗結束。實驗分為空白組（腹腔注射生理鹽水+補充5%的乙醇溶劑）、NNK組（腹腔注射 NNK+補充5%的乙醇溶劑）、20IU維生素 D干預組（腹腔注射NNK+

3、補充維生素 D20IU/kg/d）、40IU維生素 D干預組（腹腔注射NNK+補充維生素D40IU/kg/d）。注射NNK后16周，麻醉狀態(tài)下，眼球取血,檢測血清維生素D和鈣。對小鼠肺部腫瘤進行計數(shù)，計算肺癌發(fā)病率和發(fā)病數(shù)。對胃、肝、腎、肺等臟器進行 HE染色，行病理分析。免疫組化檢測小鼠肺腫瘤BMP-2和COX-2蛋白的表達。
　　4用B(a)P50mg/kg/次灌胃Balb/c小鼠，一周兩次，連續(xù)五周，共計10次，建立肺癌模型

4、。B(a)P以橄欖油為溶劑。實驗分為空白組（灌胃橄欖油+補充5%的乙醇溶劑）、B(a)P組（灌胃B(a)P+補充5%的乙醇溶劑）、20IU維生素D干預組（灌胃B(a)P+補充維生素D20IU/kg/d）、40IU維生素D干預組（灌胃B(a)P+補充維生素D40IU/kg/d）。第一次給予B(a)P后30周統(tǒng)一處死小鼠。檢測指標同3。
　　結果：
　　1維生素D喂飼4周后，小鼠血清維生素D有所上升?？瞻捉M、10、20、40IU

5、維生素D組血清維生素D(ng/ml)分別為7.24±0.22、7.82±0.33、8.98±0.56、12.04±1.98。
　　2 BMP-2和COX-2蛋白均在細胞質中表達。BMP-2在肺癌組織中的陽性表達率為77.8%（35/45），在癌旁組織中無表達（0/12）；COX-2在肺癌組織中的陽性表達率為71.1%（32/45），癌旁組織中陽性表達率為8.3%（1/12）。
　　3 NNK組、20IU維生素D干預組、40I

6、U維生素D干預組A/J小鼠肺癌發(fā)病率均為100%，肺癌發(fā)病數(shù)分別為1.80±0.84、1.60±0.89、1.60±0.55（p＞0.05）。各組均未見高鈣血癥和小鼠腎臟損傷。與NNK組相比40IU維生素D干預組和20IU維生素D干預組的體重增長受到抑制(p＜0.05)；肺癌組織中BMP-2、COX-2蛋白的表達由高到低分別為NNK組、20IU維生素D干預組、40IU維生素D干預組(p＜0.05)。
　　4 B(a)P組、20IU

7、維生素D干預組、40IU維生素D干預組Balb/c小鼠肺癌發(fā)病率均為100%，肺癌發(fā)病數(shù)分別為11.90±2.77、5.40±1.90、2.40±1.35(p＜0.05)。與B(a)P組相比40IU維生素D干預組和20IU維生素 D干預組的體重增長受到抑制(p＜0.05)；肺癌組織中 BMP-2、COX-2蛋白的表達由高到低分別為B(a)P組、20IU維生素D干預組、40IU維生素D干預組(p＜0.05)。
　　結論：
　　

8、1經(jīng)胃腸道給予小鼠補充維生素D是一種安全有效的方法。
　　2 BMP-2和COX-2蛋白在肺癌組中表達增高，進一步研究兩者在肺癌中的作用對于肺癌的防治具有重要意義。
　　3維生素D(20IU/kg/d、40IU/kg/d)對NNK誘發(fā)A/J小鼠肺癌的發(fā)病率和發(fā)病數(shù)沒有影響，但是維生素D能抑制BMP-2和COX-2在肺癌中的表達。說明維生素D在不影響腫瘤發(fā)病率和發(fā)病數(shù)的情況下，仍然能通過抑制腫瘤標記物的表達而發(fā)揮抑癌作用。