應(yīng)用流式細胞技術(shù)檢測胰腺癌患者組織中DNA含量及Heparanasel基因表達的研究.pdf

1、目的:原發(fā)性胰腺癌是臨床表現(xiàn)隱匿、進展迅速、惡性度較高的腫瘤，其預后極差、生存率極低。其生物學特點是：易侵犯神經(jīng)、血管、淋巴結(jié)及轉(zhuǎn)移率高，加之解剖位置深在、隱蔽及缺乏特異性標記物和早期缺乏特異性癥狀等特點，易發(fā)生胰腺癌復發(fā)和轉(zhuǎn)移。臨床上確診時75％以上患者己屬中晚期，胰腺癌的手術(shù)切除率低，對化療、放療不敏感，總的術(shù)后5年生存率在5％左右。 人體正常的體細胞是恒定的DNA二倍體或四倍體細胞，當受到致癌因素刺激時，DNA可以受到損傷

2、，從而引起細胞DNA質(zhì)和量的異常，成為DNA含量異常增加或減少的腫瘤細胞，即DNA非整倍體細胞，也稱異倍體細胞。國內(nèi)外研究證明，如果DNA含量發(fā)生微小的異常變化，就有可能導致惡性腫瘤。因此，測量和分析細胞核DNA含量以及DNA倍體，對胰腺癌組織的病理診斷、惡性程度及療效的判斷及預后具有重要的價值。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移必須經(jīng)歷兩個過程：(1)腫瘤細胞穿過細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)與基底膜(basement m

3、embrane，BM)組成的屏障：(2)腫瘤新生血管形成。肝素酶(heparanase，Hpa)，也稱作乙酰肝素酶或類肝素酶，是近年來發(fā)現(xiàn)并克隆成功的一種糖苷酸內(nèi)切酶，它能夠降解BM和ECM中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparin sulfate proteoglycan，HSPG)成分，并釋放和激活與HSPG結(jié)合的各種因子，現(xiàn)有研究表明，人類多種腫瘤均有較高水平的肝素酶表達，且與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。 本研究利用流式細胞術(shù)檢

4、測胰腺癌組織中的DNA含量及細胞增殖活性，同時檢測同一標本中Heparanasel基因的表達情況，探討胰腺癌組織中DNA含量、Hepararlasel基因的表達情況以及DNA含量與Hepararlasel基因表達的相關(guān)性，為研究胰腺癌的臨床和生物學行為、進行早期診斷、基因治療及評價預后提供理論和實驗依據(jù)。 方法：采用流式細胞術(shù)測定胰腺癌細胞的DNA含量及增殖活性，同時流式細胞術(shù)檢測同一標本石蠟切片中胰腺癌組織以及正常胰腺組織He

5、paranasel基因的表達情況。 結(jié)果:胰腺癌組織中Heparanasel基因的表達與胰腺癌TNM分期、組織分化以及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)(p<0.05)，但與患者年齡、性別和腫瘤大小無關(guān)(p>0.05)。胰腺癌組織中DNA倍體異倍體檢出率與患者的年齡、性別、組織分化以及腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)，異倍體檢出率在TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)。S期細胞比率(SPF)與患者年齡、性別腫瘤大小無關(guān)(p>0.05

6、)，在TNM分期、組織分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)。增殖指數(shù)(PI)與患者的年齡和性別無關(guān)(P>0.05)，在TNM分期、分化程度、腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論: 1.胰腺癌組織中DNA倍體異質(zhì)性及增殖指數(shù)能有效地反應(yīng)腫瘤的增殖情況和惡性程度，并且與臨床生物學行為關(guān)系密切。 2.Heparanasel基因的表達與胰腺癌的TNM分期、組織分化以及淋巴轉(zhuǎn)移密