慢性應(yīng)激及去交感神經(jīng)對(duì)大鼠前列腺的影響.pdf

1、研究背景與目的：人類和大鼠的前列腺，均接受兩種自主神經(jīng)纖維的支配，即來(lái)自腹下神經(jīng)與盆神經(jīng)的交感神經(jīng)與副交感神經(jīng)，分布于前列腺的間質(zhì)平滑肌和腺上皮。絕大多數(shù)交感神經(jīng)的節(jié)后纖維為腎上腺素能神經(jīng)，副交感神經(jīng)節(jié)后纖維為膽堿能神經(jīng)，一般認(rèn)為前列腺的間質(zhì)平滑肌主要接受腎上腺素能神經(jīng)支配，而上皮組織主要接受膽堿能神經(jīng)支配。交感神經(jīng)纖維末梢分泌神經(jīng)遞質(zhì)為去甲腎上腺素，對(duì)前列腺間質(zhì)細(xì)胞的分化及血管、平滑肌的收縮具有重要作用。前列腺內(nèi)的副交感神經(jīng)刺激腺泡的

2、分泌，而交感神經(jīng)則促使前列腺液排入尿道內(nèi)。交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)調(diào)節(jié)正常前列腺的發(fā)育和生長(zhǎng)。 當(dāng)機(jī)體受到各種強(qiáng)烈刺激，如缺氧、創(chuàng)傷、手術(shù)、饑餓、疼痛、寒冷及精神緊張和焦慮不安等，機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)以交感神經(jīng)系統(tǒng)（SNS）興奮，兒茶酚胺分泌增多和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸（HPA）分泌增多為主的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌反應(yīng)，以適應(yīng)強(qiáng)烈的刺激，提高機(jī)體抗病的能力。一般將能引起促腎上腺皮質(zhì)激素與糖皮質(zhì)激素分泌增加的各種刺激，稱為應(yīng)激刺激，由應(yīng)激刺激引

3、起的機(jī)體反應(yīng)稱為應(yīng)激反應(yīng)。在這一反應(yīng)中，除了促腎上腺皮質(zhì)激素、糖皮質(zhì)激素分泌增加外，兒茶酚胺分泌也增加。 前列腺炎是男性泌尿生殖系統(tǒng)常見(jiàn)疾病，其中慢性前列腺炎（CP）/慢性骨盆疼痛綜合癥（CPPS）雖占前列腺炎的90-95％，但病因不明。雖然心理應(yīng)激被認(rèn)為是其中的致病因素，但潛在的機(jī)制沒(méi)有被具體的闡明。Gatenbeck L等報(bào)道短期的標(biāo)準(zhǔn)化的應(yīng)激刺激能夠誘導(dǎo)出大鼠前列腺的無(wú)菌性炎癥和血流灌注的減少，并同時(shí)也在實(shí)驗(yàn)中測(cè)得兒茶酚胺

4、的增高，認(rèn)為這種炎癥的發(fā)生可能是血流減少的結(jié)果，但對(duì)長(zhǎng)期的應(yīng)激刺激對(duì)前列腺的作用沒(méi)有進(jìn)行研究。Rosenzweig等在試驗(yàn)中給大鼠每日注射腎上腺素類神經(jīng)遞質(zhì)苯腎上腺素后，短期內(nèi)能夠誘導(dǎo)大鼠前列腺的炎性病變，并在第7天觀察到前列腺內(nèi)上皮瘤樣增生。這些都提示了交感神經(jīng)在前列腺疾病中起著重要的作用。 盡管前列腺增生的發(fā)生一直被認(rèn)為是老齡和雄激素功能存在的結(jié)果，對(duì)前列腺增生病因的認(rèn)識(shí)仍不清楚。對(duì)高血壓人群的良性前列腺增生（BPH）發(fā)病率

5、的調(diào)查結(jié)果以及在遺傳性高血壓大鼠中觀察到自發(fā)性前列腺組織增生病變均提示前列腺病變與高血壓之間有著相關(guān)性，而高血壓的發(fā)生正是和交感神經(jīng)末梢神經(jīng)遞質(zhì)的過(guò)量釋放密切相關(guān)。最近的資料顯示在BPH患者中，標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)應(yīng)激引起的交感神經(jīng)過(guò)度活動(dòng)與前列腺增生疾病的主、客觀的評(píng)價(jià)參數(shù)相關(guān)，表明應(yīng)激狀態(tài)和前列腺疾病的發(fā)生和進(jìn)展之間有著某種相關(guān)性。 最近越來(lái)越多的研究重視代謝綜合征和它的主要內(nèi)分泌紊亂-高胰島素血癥在前列腺增生發(fā)病中的作用，代謝綜合征

6、和高胰島血癥的患者在應(yīng)激負(fù)荷時(shí)有著高的SNS和HPA軸的反應(yīng)性，而短期或長(zhǎng)期的應(yīng)激均能引起血胰島素水平的增高。越來(lái)越多的數(shù)據(jù)顯示交感神經(jīng)活性增高也可能是前列腺增生及伴隨的下尿路癥狀（LUTS）產(chǎn)生的獨(dú)立的致病因素。去除交感神經(jīng)能夠引起大鼠前列腺腹側(cè)葉重量、DNA及蛋白含量的減少。交感神經(jīng)的功能異常對(duì)前列腺有促有絲分裂的作用。臨床應(yīng)用α受體阻滯劑可以通過(guò)恢復(fù)自主神經(jīng)的平衡，并直接作用于前列腺，影響其生長(zhǎng)和增大。 大鼠的盆神經(jīng)節(jié)接受

7、兩種不同的神經(jīng)輸入，其節(jié)后神經(jīng)支配盆腔臟器，即腹下神經(jīng)（交感神經(jīng)）和盆神經(jīng)（副交感神經(jīng)）。腹下神經(jīng)和盆神經(jīng)的纖維廣泛分布到前列腺，調(diào)節(jié)前列腺的生長(zhǎng)、發(fā)育和功能。Gosling于1983年通過(guò)組織化學(xué)染色的方法發(fā)現(xiàn)，膽堿能的神經(jīng)纖維支配上皮細(xì)胞、包膜，以及間質(zhì)的一些平滑肌細(xì)胞，而腎上腺素能神經(jīng)主要支配包膜和間質(zhì)的平滑肌細(xì)胞。兩種不同神經(jīng)在前列腺發(fā)揮不同的功能，Wang和Bruschini等研究發(fā)現(xiàn)擬交感神經(jīng)藥通過(guò)收縮平滑肌促使前列腺分泌，

8、而擬副交感神經(jīng)藥通過(guò)刺激上皮細(xì)胞分泌的某種機(jī)制引起前列腺液的產(chǎn)生。由此從功能上判斷得到的結(jié)論便是：交感神經(jīng)主要支配間質(zhì)，副交感神經(jīng)支配上皮。同其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盆神經(jīng)叢有許多散在分布且相互間聯(lián)系的盆神經(jīng)節(jié)組成不同，大鼠的盆神經(jīng)節(jié)有單一的主要的神經(jīng)節(jié)（Maj，P.G）組成，且接受獨(dú)立的交感和副交感神經(jīng)的輸入，這就為研究交感神經(jīng)對(duì)前列腺的影響提供了理想的模型。大鼠的前列腺間質(zhì)的血管和平滑肌表達(dá)多種α受體，接受交感神經(jīng)的支配，調(diào)節(jié)間質(zhì)的生長(zhǎng)、發(fā)育及

9、血管平滑肌收縮，并通過(guò)問(wèn)質(zhì)-上皮細(xì)胞間的相互作用調(diào)節(jié)腺上皮的生長(zhǎng)和分化，間質(zhì)-上皮相互作用同樣在前列腺增生發(fā)病中發(fā)揮作用。 我們推測(cè)應(yīng)激可以通過(guò)交感神經(jīng)的過(guò)度活動(dòng)，進(jìn)而影響前列腺的功能，導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生，阻斷交感神經(jīng)將抑制前列腺疾病的發(fā)生。本研究應(yīng)用束縛浸水實(shí)驗(yàn)制造大鼠心理應(yīng)激模型，觀察慢性應(yīng)激及阻斷交感神經(jīng)對(duì)大鼠前列腺的影響，包括血流、重量、前列腺液分泌、組織病理及神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）表達(dá)的改變，探討交感神經(jīng)系統(tǒng)在前列腺疾病中

10、發(fā)揮的作用。 材料與方法: 3月齡SPF級(jí)雄性wistar大鼠購(gòu)于山東大學(xué)、山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，共32只，每4只一籠。大鼠飼養(yǎng)于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，將大鼠置于晝夜節(jié)律光照條件下，自由進(jìn)食進(jìn)水，室溫在18-22℃，飼養(yǎng)一周以適應(yīng)環(huán)境，每日觸摸1次，每次約2分鐘，使動(dòng)物適應(yīng)實(shí)驗(yàn)人員的操作。 1.應(yīng)激方法 大鼠束縛浸水實(shí)驗(yàn)：動(dòng)物隨機(jī)分成四組：A、正常對(duì)照組，B、應(yīng)激組，C、去交感神經(jīng)組，D、應(yīng)激+去交

11、感神經(jīng)組，每組8只。 應(yīng)激過(guò)程：B、D組大鼠每日行束縛浸水1小時(shí)，連續(xù)14天。對(duì)照組不接受任何刺激，自由攝食飲水。大鼠在束縛實(shí)驗(yàn)期間禁水、禁食。束縛浸水實(shí)驗(yàn)：把實(shí)驗(yàn)大鼠用傳統(tǒng)方法束縛后放置在23℃溫水中，水面和大鼠劍突平齊。 2.化學(xué)性去交感神經(jīng)：B、D組于應(yīng)激第1、8天給予六羥多巴胺50mg/kg尾靜脈注射。 3.麻醉方法：10％水合氯醛，每0.3ml對(duì)應(yīng)100g大鼠，腹腔注射。 4.觀測(cè)指標(biāo) （

12、1）前列腺腹側(cè)葉血流測(cè)定 應(yīng)用Periflux system5000多普勒超聲測(cè)定大鼠腹側(cè)葉血流灌注情況。每只大鼠經(jīng)麻醉后，仰臥，下腹部切口。仔細(xì)暴露前列腺的腹側(cè)葉，將探針頭輕輕放在上面。靜止的放置30s以穩(wěn)定測(cè)量血流值并記錄。隨機(jī)選取器官表面3點(diǎn)測(cè)量，獲得均值。同法測(cè)定腎臟的血流。 （2）采血測(cè)定血皮質(zhì)醇、腎上腺素及去甲腎上腺素水平 動(dòng)物處死前，使用預(yù)冷注射器從大鼠頸靜脈采血7ml，加入預(yù)先干燥的肝素管，-4℃3

13、000r/min低溫離心15分鐘分離血漿。吸取血漿加入預(yù)冷試管中儲(chǔ)存于-30℃，30d內(nèi)應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定血兒茶酚胺水平，放免法測(cè)定皮質(zhì)醇濃度。 （3）前列腺標(biāo)本處理： 每組中6只大鼠：暴露前列腺葉，右側(cè)的腹側(cè)葉（VP）、側(cè)葉（LP）、背側(cè)葉（DP）被分離，每2只大鼠右側(cè)前列腺的相同葉放在一起（每葉有3個(gè)集合的標(biāo)本）用來(lái)提取分泌物。解剖左側(cè)的VP、LP、DP，并固定于10％的福爾馬林中預(yù)備組織學(xué)檢查。 另2只大

14、鼠：每只取成對(duì)的VP、LP、DP，稱重，用來(lái)準(zhǔn)備分泌物。 分泌物的提取是將分離的前列腺葉用鑷子撕開(kāi)，在50ml的聚丙烯離心管內(nèi)不銹鋼的濾網(wǎng)上低速離心：150g×3min4℃。移走帶有組織的濾網(wǎng)，離心管中收集的液體再次離心：960g×10min4℃以去除細(xì)胞。收集上清，稱容，并做為前列腺分泌物冷凍于粉狀干冰中。濾網(wǎng)上的組織稱重并冷凍于-70℃。 （4）前列腺組織學(xué) 大鼠左側(cè)前列腺三側(cè)葉均切片，切片厚度4μm，每個(gè)標(biāo)本

15、連續(xù)切片2片，1片行蘇木素-伊紅染色，1片做NGF免疫組化染色。Olympus BX51倒置熒光顯微鏡觀察組織切片，Olympus DP71圖象采集系統(tǒng)在相同光透量情況下采集圖像。對(duì)每個(gè)標(biāo)本HE染色切片進(jìn)行病理學(xué)檢查（由病理科醫(yī)生協(xié)助完成），應(yīng)用美國(guó)Image Pro-Plus圖像分析系統(tǒng)對(duì)組化切片進(jìn)行圖像分析，測(cè)得每個(gè)切片陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值。 5.統(tǒng)計(jì)方法 統(tǒng)計(jì)方法以雙因素析因設(shè)計(jì)資料的方差分析檢驗(yàn)組間差異顯著性，

16、統(tǒng)計(jì)處理軟件為SPSS13.0，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD），P<0.05認(rèn)為差異有顯著性意義。 結(jié)論: 1.慢性應(yīng)激能夠引起大鼠腹側(cè)前列腺葉血流灌注、重量及前列腺液分泌量的減少，血漿皮質(zhì)醇升高。 2.慢性應(yīng)激可以使大鼠前列腺腹側(cè)葉上皮呈增生樣改變，而側(cè)葉、背側(cè)葉基本不受影響。 3.去除交感神經(jīng)導(dǎo)致前列腺腺泡的擴(kuò)張，同時(shí)給予應(yīng)激時(shí)腹側(cè)葉上皮未見(jiàn)增生改變。交感神經(jīng)的過(guò)度活動(dòng)參與前列腺疾病的發(fā)病。