前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)調(diào)控平滑肌活動(dòng)的功能初探.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)的形態(tài)學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)1：前列腺ICC與神經(jīng)和平滑肌的超微形態(tài)學(xué)聯(lián)系
　　目的：觀察前列腺ICC超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及與前列腺神經(jīng)、平滑肌細(xì)胞之間的超微結(jié)構(gòu)聯(lián)系。
　　方法：制作豚鼠前列腺超薄組織切片，透射電鏡下依據(jù)超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)辨識(shí)ICC并觀察其與神經(jīng)、平滑肌細(xì)胞之間的超微結(jié)構(gòu)聯(lián)系。
　　結(jié)果：豚鼠前列腺組織內(nèi)存在符合典型ICC超微結(jié)

2、構(gòu)鑒定標(biāo)準(zhǔn)的間質(zhì)細(xì)胞，這些前列腺ICC分布于腺上皮和平滑肌組織之間的間質(zhì)中以及平滑肌細(xì)胞之間，與相鄰的神經(jīng)末梢形成突觸樣連接，同一ICC可以通過突觸樣連接和多個(gè)的神經(jīng)末梢相鄰。ICC和周圍的平滑肌細(xì)胞密切接觸，之間存在縫隙連接和直接接觸等連接形式。
　　結(jié)論：豚鼠前列腺ICC具有介導(dǎo)前列腺神經(jīng)信號(hào)，調(diào)控平滑肌活動(dòng)的超微形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。
　　第一部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)的形態(tài)學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)2：前列腺ICC與交

3、感神經(jīng)和平滑肌的組織形態(tài)學(xué)聯(lián)系
　　目的：觀察前列腺ICC和交感神經(jīng)以及平滑肌細(xì)胞之間的組織形態(tài)學(xué)聯(lián)系。
　　方法：制作豚鼠前列腺組織冰凍切片并進(jìn)行免疫熒光染色。使用c-Kit抗體標(biāo)記ICC， TH和DβH抗體標(biāo)記交感神經(jīng)纖維，α-actin抗體標(biāo)記平滑肌細(xì)胞，分別采用c-Kit和TH抗體，c-Kit和DβH抗體，c-Kit和α-actin抗體組合進(jìn)行免疫熒光雙染色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：前列腺ICC分布于TH、DβH陽

4、性的交感神經(jīng)周圍，多沿交感神經(jīng)纖維平行分布并和神經(jīng)纖維形成密切、廣泛的接觸。ICC的胞體和細(xì)胞突起緊貼相鄰的平滑肌細(xì)胞形成密切的接觸聯(lián)系。前列腺ICC自身表達(dá)交感神經(jīng)標(biāo)記物TH和DβH。
　　結(jié)論：豚鼠前列腺ICC具有介導(dǎo)前列腺交感神經(jīng)信號(hào)，調(diào)控平滑肌活動(dòng)的組織形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)以及自身合成兒茶酚胺的潛能。
　　第二部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)的功能學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)1：α1受體和Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表

5、達(dá)
　　目的：觀察α1腎上腺素受體和縫隙連接Cx43等功能蛋白在前列腺ICC上的表達(dá)。
　　方法：制作豚鼠前列腺組織冰凍切片，分離、培養(yǎng)前列腺ICC并進(jìn)行免疫熒光染色。分別采用c-Kit和α1受體抗體，c-Kit和Cx43抗體組合進(jìn)行免疫熒光雙染色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：前列腺組織內(nèi)ICC上存在α1受體和Cx43等功能蛋白的表達(dá)，其中ICC上α1受體的表達(dá)明顯強(qiáng)于周圍的平滑肌。分離、培養(yǎng)的前列腺ICC上同樣表達(dá)α1受體和

6、Cx43。
　　結(jié)論：前列腺ICC為交感神經(jīng)的靶細(xì)胞，并可能借助細(xì)胞膜上的Cx43與周圍平滑肌細(xì)胞形成信息傳遞的通道。
　　第二部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)的功能學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)2：交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)前列腺ICC興奮性的影響
　　目的：觀察前列腺ICC對(duì)交感神經(jīng)遞質(zhì)NE的反應(yīng)性。
　　方法：體外分離、培養(yǎng)、鑒定前列腺ICC，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄NE誘發(fā)ICC產(chǎn)生的電流，并進(jìn)一步觀察使用α受體阻

7、滯劑酚妥拉明和α1受體阻滯劑哌唑嗪前后ICC細(xì)胞電流的變化。
　　結(jié)果：在前列腺ICC上沒有記錄到自發(fā)的內(nèi)向電流（n=6），當(dāng)電壓鉗制在?60mV時(shí)NE可以誘發(fā)前列腺ICC產(chǎn)生顯著的內(nèi)向電流(n=6)。1μmol NE、10μmol NE、100μmol NE誘發(fā)的內(nèi)向電流為?106±29 pA、?210±68pA和?368±113pA。誘發(fā)的內(nèi)向電流幅度和NE具有一定的量效關(guān)系(P<0.01)。在使用α受體阻滯劑酚妥拉明和α1受

8、體阻滯劑哌唑嗪后，NE未誘發(fā)ICC產(chǎn)生明顯的內(nèi)向電流。
　　結(jié)論：前列腺ICC為前列腺交感神經(jīng)信號(hào)的功能性靶細(xì)胞，α1受體為ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)的功能學(xué)基礎(chǔ)。
　　第二部分 豚鼠前列腺ICC介導(dǎo)交感神經(jīng)信號(hào)的功能學(xué)研究
　　實(shí)驗(yàn)3：前列腺ICC在交感神經(jīng)遞質(zhì)誘發(fā)平滑肌活動(dòng)中的作用
　　目的：探索前列腺ICC在交感神經(jīng)遞質(zhì)NE誘發(fā)平滑肌活動(dòng)中的作用。
　　方法：制作前列腺平滑肌肌條，將肌條固定于灌流槽中，記

9、錄NE誘發(fā)的前列腺肌條收縮幅度和頻率，以及加入Glivec后收縮幅度和頻率的變化。
　　結(jié)果：在體外NE（50μmol/L）可以誘發(fā)前列腺肌條產(chǎn)生明顯的收縮活動(dòng)，收縮幅度為0.98±0.16 g，收縮頻率為2.54±0.28次/分。使用Glivec后肌條收縮幅度顯著下降，50μmol/L組為0.56±0.07 g（P<0.01），200μmol/L組為0.25±0.05 g（P<0.01）；收縮頻率50μmol/L組為2.67±0