福建省部分地區(qū)2010-2011年病毒性腦炎常見病原篩查研究.pdf

1、福建省是日本乙型腦炎的流行區(qū)，且每年都有多例不明原因發(fā)熱的病毒性腦炎病例。所以本研究首次在福建省三明市、南平市、福州市和龍巖市四個地區(qū)系統(tǒng)地采集蚊蟲和不明原因發(fā)熱的腦炎病例標(biāo)本，進行福建省部分地區(qū)病毒性腦炎常見病原篩查，以了解福建省部分地區(qū)蚊蟲媒介中蟲媒病毒的種類、感染率以及病毒性腦炎常見病原種類，為我國尤其是福建省病毒性腦炎暴發(fā)流行的預(yù)防控制和診斷提供科學(xué)依據(jù)。
　　一、采集標(biāo)本：于2010年7月－8月和2011年6月，在福建省

2、三明市、南平市、福州市和龍巖市四個采集點使用牛帳誘蚊法采集到中華按蚊、三帶喙庫蚊和騷擾阿蚊共3屬3種8927只（179批），以三帶喙庫蚊和中華按蚊為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢蚊種；于2010年1月-12月依靠當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)部門在南平市、福州市和龍巖市三個采集點共采集到來自383例不明原因發(fā)熱和腦炎病例的304份急性期血清標(biāo)本、15份恢復(fù)期血清標(biāo)本和79份腦脊液標(biāo)本。
　　二、對蚊蟲標(biāo)本進行實驗室篩查：用組織震蕩器將蚊蟲標(biāo)本研磨處理后，使用Trizol L

3、S Reagent從蚊蟲研磨液中提取總 RNA，使用隨機引物和Ready-to-GoTM You prime First-Strand Beads試劑盒制備cDNA。采用PCR技術(shù)篩查到乙型腦炎病毒PrM片段核酸陽性5份，經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)5份乙型腦炎病毒均為基因1型。同時將蚊蟲研磨液接種BHK-21細胞和C6/36細胞進行病毒分離，沒有分離到活病毒。
　　三、全長基因組擴增與序列分析：用基因1型乙腦病毒全基因組引物對5份乙腦病毒核酸

4、陽性標(biāo)本cDNA進行擴增，從福建省南平市建陽縣采集的三帶喙庫蚊陽性標(biāo)本cDNA中擴增出基因組全序列，命名為FJ-JY-10-73。PCR產(chǎn)物直接測序后，應(yīng)用ATGC、Clustal X（1.83）、MegAlign、GeneDoc3.2和Mega4等生物學(xué)軟件完成全基因組序列拼接、比對和核苷酸與氨基酸同源性分析、系統(tǒng)進化分析。結(jié)果表明：福建省新檢測到的基因1型乙腦病毒FJ-JY-10-73株具有典型的基因1型乙腦病毒特征，基因組全長為1

5、0965個核苷酸，與浙江省、上海市、臺灣、山東省和遼寧省分離的基因1型乙腦病毒進化關(guān)系最近，具有一定地域性；與減毒活疫苗株（SA14-14-2）的核苷酸和氨基酸同源性分別為88.6％和97.5%，現(xiàn)用疫苗能夠起到保護作用。
　　四、進行蚊蟲感染率計算：采用最大似然法（MLE）計算蚊蟲中乙腦病毒的最小感染率（MIR）。結(jié)果顯示：三明市沙縣中華按蚊的最小感染率最高為1.25/1,000；南平市建陽縣三帶喙庫蚊的最小感染率最高為1.76

6、/1,000；福州市連江縣中華按蚊的最小感染率最高為0.65/1,000。
　　五、對病例標(biāo)本進行常見病原篩查：對383例不明原因發(fā)熱和腦炎病例的急性期血清和腦脊液標(biāo)本，依次進行5種病毒性腦炎常見病原（乙型腦炎病毒、埃可病毒、柯薩奇病毒、單純皰疹病毒和腮腺炎病毒）的特異性IgM抗體與核酸篩查。篩查出抗體陽性73例，陽性率為19.06%，均為單份血清標(biāo)本病例。其中，包括埃可病毒和/或柯薩奇病毒抗體陽性47例，腮腺炎病毒抗體陽性11例

7、，乙型腦炎病毒抗體陽性9例，單純皰疹病毒抗體陽性6例。對抗體檢測陽性的73份血清標(biāo)本與乙型腦炎病毒抗體檢測全部陰性的79份腦脊液標(biāo)本用試劑盒進行RNA與DNA同時提取后，運用PCR技術(shù)進行以上5種常見病毒核酸篩查，從腦脊液中篩查出腸道病毒核酸陽性7例和單純皰疹病毒核酸陽性1例，未篩查到乙型腦炎病毒核酸。將79份腦脊液標(biāo)本接種BHK-21細胞進行病毒分離，未分離到病毒。
　　本研究首次系統(tǒng)地在福建省進行病毒性腦炎常見病原的篩查研究，

8、且首次擴增得到FJ-JY-10-73株基因1型乙型腦炎病毒全基因組序列。此次在福建省蚊蟲中篩查到的乙腦病毒為可被疫苗株保護的典型基因1型乙腦病毒，在進化關(guān)系上與我國東部沿海省份蚊蟲中分離的1型乙腦毒株相近，表明基因1型乙腦病毒正在取代原來的3型乙腦病毒而成為福建省優(yōu)勢基因型別。福建省部分地區(qū)病毒性腦炎常見病原的構(gòu)成為腸道病毒（?？刹《竞?或柯薩奇病毒）、腮腺炎病毒、乙型腦炎病毒、單純皰疹病毒；福建省部分地區(qū)病毒性腦炎呈以21-60歲成人