福建省部分地區(qū)2010-2011年病毒性腦炎常見病原篩查研究.pdf

1、福建省是日本乙型腦炎的流行區(qū)，且每年都有多例不明原因發(fā)熱的病毒性腦炎病例。所以本研究首次在福建省三明市、南平市、福州市和龍巖市四個(gè)地區(qū)系統(tǒng)地采集蚊蟲和不明原因發(fā)熱的腦炎病例標(biāo)本，進(jìn)行福建省部分地區(qū)病毒性腦炎常見病原篩查，以了解福建省部分地區(qū)蚊蟲媒介中蟲媒病毒的種類、感染率以及病毒性腦炎常見病原種類，為我國(guó)尤其是福建省病毒性腦炎暴發(fā)流行的預(yù)防控制和診斷提供科學(xué)依據(jù)。
　　一、采集標(biāo)本：于2010年7月－8月和2011年6月，在福建省

2、三明市、南平市、福州市和龍巖市四個(gè)采集點(diǎn)使用牛帳誘蚊法采集到中華按蚊、三帶喙庫(kù)蚊和騷擾阿蚊共3屬3種8927只（179批），以三帶喙庫(kù)蚊和中華按蚊為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)蚊種；于2010年1月-12月依靠當(dāng)?shù)叵嚓P(guān)部門在南平市、福州市和龍巖市三個(gè)采集點(diǎn)共采集到來自383例不明原因發(fā)熱和腦炎病例的304份急性期血清標(biāo)本、15份恢復(fù)期血清標(biāo)本和79份腦脊液標(biāo)本。
　　二、對(duì)蚊蟲標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室篩查：用組織震蕩器將蚊蟲標(biāo)本研磨處理后，使用Trizol L

3、S Reagent從蚊蟲研磨液中提取總 RNA，使用隨機(jī)引物和Ready-to-GoTM You prime First-Strand Beads試劑盒制備cDNA。采用PCR技術(shù)篩查到乙型腦炎病毒PrM片段核酸陽(yáng)性5份，經(jīng)序列分析發(fā)現(xiàn)5份乙型腦炎病毒均為基因1型。同時(shí)將蚊蟲研磨液接種BHK-21細(xì)胞和C6/36細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，沒有分離到活病毒。
　　三、全長(zhǎng)基因組擴(kuò)增與序列分析：用基因1型乙腦病毒全基因組引物對(duì)5份乙腦病毒核酸

4、陽(yáng)性標(biāo)本cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，從福建省南平市建陽(yáng)縣采集的三帶喙庫(kù)蚊陽(yáng)性標(biāo)本cDNA中擴(kuò)增出基因組全序列，命名為FJ-JY-10-73。PCR產(chǎn)物直接測(cè)序后，應(yīng)用ATGC、Clustal X（1.83）、MegAlign、GeneDoc3.2和Mega4等生物學(xué)軟件完成全基因組序列拼接、比對(duì)和核苷酸與氨基酸同源性分析、系統(tǒng)進(jìn)化分析。結(jié)果表明：福建省新檢測(cè)到的基因1型乙腦病毒FJ-JY-10-73株具有典型的基因1型乙腦病毒特征，基因組全長(zhǎng)為1

5、0965個(gè)核苷酸，與浙江省、上海市、臺(tái)灣、山東省和遼寧省分離的基因1型乙腦病毒進(jìn)化關(guān)系最近，具有一定地域性；與減毒活疫苗株（SA14-14-2）的核苷酸和氨基酸同源性分別為88.6％和97.5%，現(xiàn)用疫苗能夠起到保護(hù)作用。
　　四、進(jìn)行蚊蟲感染率計(jì)算：采用最大似然法（MLE）計(jì)算蚊蟲中乙腦病毒的最小感染率（MIR）。結(jié)果顯示：三明市沙縣中華按蚊的最小感染率最高為1.25/1,000；南平市建陽(yáng)縣三帶喙庫(kù)蚊的最小感染率最高為1.76

6、/1,000；福州市連江縣中華按蚊的最小感染率最高為0.65/1,000。
　　五、對(duì)病例標(biāo)本進(jìn)行常見病原篩查：對(duì)383例不明原因發(fā)熱和腦炎病例的急性期血清和腦脊液標(biāo)本，依次進(jìn)行5種病毒性腦炎常見病原（乙型腦炎病毒、?？刹《?、柯薩奇病毒、單純皰疹病毒和腮腺炎病毒）的特異性IgM抗體與核酸篩查。篩查出抗體陽(yáng)性73例，陽(yáng)性率為19.06%，均為單份血清標(biāo)本病例。其中，包括埃可病毒和/或柯薩奇病毒抗體陽(yáng)性47例，腮腺炎病毒抗體陽(yáng)性11例

7、，乙型腦炎病毒抗體陽(yáng)性9例，單純皰疹病毒抗體陽(yáng)性6例。對(duì)抗體檢測(cè)陽(yáng)性的73份血清標(biāo)本與乙型腦炎病毒抗體檢測(cè)全部陰性的79份腦脊液標(biāo)本用試劑盒進(jìn)行RNA與DNA同時(shí)提取后，運(yùn)用PCR技術(shù)進(jìn)行以上5種常見病毒核酸篩查，從腦脊液中篩查出腸道病毒核酸陽(yáng)性7例和單純皰疹病毒核酸陽(yáng)性1例，未篩查到乙型腦炎病毒核酸。將79份腦脊液標(biāo)本接種BHK-21細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，未分離到病毒。
　　本研究首次系統(tǒng)地在福建省進(jìn)行病毒性腦炎常見病原的篩查研究，

8、且首次擴(kuò)增得到FJ-JY-10-73株基因1型乙型腦炎病毒全基因組序列。此次在福建省蚊蟲中篩查到的乙腦病毒為可被疫苗株保護(hù)的典型基因1型乙腦病毒，在進(jìn)化關(guān)系上與我國(guó)東部沿海省份蚊蟲中分離的1型乙腦毒株相近，表明基因1型乙腦病毒正在取代原來的3型乙腦病毒而成為福建省優(yōu)勢(shì)基因型別。福建省部分地區(qū)病毒性腦炎常見病原的構(gòu)成為腸道病毒（?？刹《竞?或柯薩奇病毒）、腮腺炎病毒、乙型腦炎病毒、單純皰疹病毒；福建省部分地區(qū)病毒性腦炎呈以21-60歲成人