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1、該論文通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)獲得了E.coli PGA基因和P.rettgeri PGA(ATCC29944)基因.序列測(cè)定和計(jì)算機(jī)聯(lián)配結(jié)果表明:E.coli PGA與Genebank AF237653一致;P.rettgeri PGA DNA序列與文獻(xiàn)報(bào)道(ATCC31052)的同源性只有90.2%,所編碼的氨基酸序列與文獻(xiàn)報(bào)道同源性為92.8%,C端存在突變.將所得的兩種來(lái)源PGA基因分別克隆至T7lac啟動(dòng)子控制下的表達(dá)載體
2、pET24a中,構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒pETePGA和pETrPGA,并分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),得到基因工程菌BL21(DE3)(pETePGA)和BL21(DE3)(pETrPGA).對(duì)基因工程菌進(jìn)行了發(fā)酵條件的優(yōu)化,研究IPTG濃度、發(fā)酵溫度和不同碳源對(duì)PGA基因表達(dá)的影響.在24℃、1.0mmol/L IPTG、5g/L甘油的條件下,可以高效表達(dá).BL21(DE3)(pETePGA)和BL21(DE3)(pETrPGA)的表達(dá)
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