ACE2基因A9570G多態(tài)性與廣東地區(qū)漢族2型糖尿病合并冠心病及冠脈病變程度的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景: 隨著人們生活水平的提高，勞動方式及飲食結(jié)構(gòu)的改變，平均壽命的延長，糖尿病(diabetesmellitus，DM)的發(fā)病率逐年增高，已成為繼腫瘤、心腦血管病之后的第三位嚴(yán)重危害人們健康的非傳染性疾病。然而，DM本身并不可怕，可怕的是它的并發(fā)癥。DM可引起多種慢性并發(fā)癥，導(dǎo)致多器官的損害，成為DM患者致死致殘的重要原因。其中，DM的心血管病變是其最嚴(yán)重的并發(fā)癥，是DM患者死亡的主要原因。DM患者具有顯著的心血管病好發(fā)傾

2、向，且DM患者合并CHD，冠脈病變常廣泛且嚴(yán)重，治療棘手、費(fèi)用高。因此，尋找其病因并建立有效的心血管發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測和發(fā)病前診斷技術(shù)，在臨床上具有重要實(shí)用價(jià)值。事實(shí)上，冠狀動脈粥樣硬化是多種危險(xiǎn)因素相互作用的結(jié)果，DM患者常同時(shí)伴有血脂代謝異常、高血壓等多種危險(xiǎn)因素，然而有研究發(fā)現(xiàn)，即使血糖控制水平和各種心血管危險(xiǎn)因素相似，DM患者CHD發(fā)病率以及血管病變程度也存在差異；此外，不同種族DM人群冠心病(coronaryheartdisease

3、,CHD)的發(fā)生率也不同，可見傳統(tǒng)的心血管危險(xiǎn)因素并不能完全解釋DM并發(fā)CHD的發(fā)生率以及冠脈病變的不同表現(xiàn)，其可能與個體遺傳背景相關(guān)。 2型糖尿病(Type2Diabetesmellitus,T2DM)占所有DM患者的95％左右，是威脅人類健康最主要的類型。目前認(rèn)為，T2DM是由遺傳、環(huán)境、行為多種危險(xiǎn)因素共同參與或相互作用引起的多因子病。遺傳學(xué)病因研究表明，該病受多基因調(diào)控，其并發(fā)癥也可能受病人遺傳背景的影響。目前已發(fā)現(xiàn)多種

4、基因與T2DM及其血管并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展有關(guān)，主要是與脂肪代謝、脂蛋白氧化和凝血過程相關(guān)的候選基因。近年來，隨著對腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensinsystem,RAS)的深入研究，其在T2DM及其并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展中的作用被大量實(shí)驗(yàn)所證實(shí)，RAS各成員相關(guān)基因多態(tài)性也備受關(guān)注，但研究結(jié)果并不一致，有必要深入研究。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(angiotensinconveaingenzyme2,ACE2)是2000年發(fā)現(xiàn)的RAS

5、新成員，發(fā)揮與血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensinconvertingenzyme,ACE)相拮抗的作用，在RAS中發(fā)揮重要作用。已有研究表明，該基因某些位點(diǎn)的多態(tài)性與疾病的發(fā)生和或表型相關(guān)。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片段多態(tài)性(polymerasechainreactionrestrictionfragmentlengthpolymorphism，PCR-RFLP)分析法，檢測ACE2基因A9570G多態(tài)性，通過分析ACE2基

6、因A9570G多態(tài)性在不同人群中的分布情況，初步揭示其與T2DM并發(fā)CHD的關(guān)系，為進(jìn)一步研究T2DM并發(fā)CHD的分子遺傳機(jī)制打下基礎(chǔ)，有助于尋找和建立有效的心血管發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測和發(fā)病前診斷技術(shù)。通過亞組分析，比較不同基因型間冠脈病變情況，尋找可用于判斷病情和評估預(yù)后的基因型，有助于指導(dǎo)臨床治療。 目的意義: 1.觀察ACE2基因A9570G多態(tài)性與T2DM并發(fā)CHD的相關(guān)性，初步確定相關(guān)疾病的易感基因。 2.篩選

7、T2DM并發(fā)CHD的敏感基因型，有助于易感人群的早期防治。 3.尋找和確定影響冠脈病變程度的基因型，根據(jù)基因型制定治療方案，從而使治療個體化、有效化。 4.從遺傳學(xué)角度尋找T2DM并發(fā)CHD的危險(xiǎn)因素，有助于揭示其遺傳病因和發(fā)病機(jī)制。 對象與方法: 1.研究對象 對照組100例，T2DM患者208例，其中單純2型糖尿病組(T2DM組)112例，2型糖尿病合并冠心病組(T2DM+CHD組)96例，單

8、純冠心病組(CHD組)90例。所有研究對象均空腹抽取外周靜脈血4ml，立即提取DNA或低溫保存?zhèn)溆谩?2.實(shí)驗(yàn)方法 2.1用PCR-RFLP分析法檢測各組ACE2基因A9570G多態(tài)性分布情況，同時(shí)記錄一般臨床資料及生化指標(biāo)，綜合分析ACE2基因A9570G多態(tài)性與T2DM并發(fā)CHD的相關(guān)性。 2.2以所有T2DM患者是否患有CHD為因變量Y，年齡、T2DM。病程、體重指數(shù)、收縮壓、舒張壓、糖化血紅蛋白、總膽固醇

9、、甘油三脂、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和等位基因?yàn)樽宰兞縓，進(jìn)行二分類的Logistic回歸分析，尋找T2DM患者并發(fā)CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。 2.3CHD組和T2DM+CHD組分別按基因型進(jìn)行亞組分析，以冠脈病變支數(shù)和Genisini積分評價(jià)冠脈病變情況，分析不同基因型與冠脈病變程度的關(guān)系。 結(jié)果: 1.廣東地區(qū)漢族人群中存在ACE2基因A9570G多態(tài)性。在健康對照組，男性A/G等位基因頻率為0.56/0.44

10、；女性A/G等位基因頻率為0.52/0.48，AA/AG/GG基因型分別為0.24/0.56/0.2，經(jīng)X2檢驗(yàn)符合Hardy-Weinberg平衡，提示樣本具有群體代表性。與香港健康人比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與高加索人比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.在女性，四組間等位基因頻率和基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.032，P=0.999和X2=0.752，P=0.993)；在男性，四組間等位基因頻率/基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

11、X2=11.972，P=0.007)，組間多重比較顯示：T2DM+CHD組與對照組、T2DM組、CHD組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，G等位基因頻率明顯高于其它三組；對照組、T2DM組、CHD組三組間兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.Logistic回歸分析結(jié)果顯示G等位基因是男性T2DM患者并發(fā)CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(Exp(B)=2.301，95％CI1.041-5.084)，不依賴于年齡、體重指數(shù)、T2DM病程、糖化血紅蛋白、總

12、膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白以及高密度脂蛋白；在女性，G等位基因未進(jìn)入方程，不是女性T2DM患者并發(fā)CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(Exp(B)=0.561，95％CI為0.88-3.587)。 4.T2DM+CHD組不同基因型間冠脈病變程度的比較：在男性，不同基因型間冠脈病變支數(shù)和Genisini積分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=6.297，P=0.012和Z=-2.823，P=0.005)，G基因型者冠脈病變支數(shù)和Genisini積分高于

13、A基因型者；在女性，不同基因型間冠脈病變支數(shù)和Genisini積分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.020，P=0.990和X2=0.791，P=0.673)，G基因型者冠脈病變支數(shù)和Genisini積分與A基因型者相同。CHD組不同基因型間冠脈病變程度的比較：男性和女性各組間冠脈病變支數(shù)和Genisini積分差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(在男性，X2=2.035，P=0.154和Z=-0.778，P=0.436；在女性，X2=0.021，P=0.98

14、9和X2=1.854，P=0.396)，G基因型者冠脈病變支數(shù)和Genisini積分與A基因型者相同。 結(jié)論: 1.ACE2基因A9570G多態(tài)性分布具有種族差異。 2.ACE2基因A9570G多態(tài)性與男性T2DM患者并發(fā)CHD相關(guān)，G等位基因可能是男性T2DM并發(fā)CHD的易感基因和獨(dú)立危險(xiǎn)因素。 3.ACE2基因A9570G多態(tài)性可能與T2DM的發(fā)病不相關(guān)。 4.ACE2基因A9570G多態(tài)性可