補(bǔ)腎益氣方調(diào)控人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞SOCS3表達(dá)改善其生物學(xué)功能的研究.pdf

1、v955卵0鍰旦大學(xué)博士學(xué)位論文補(bǔ)腎益氣方調(diào)挫人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞SOCs3表達(dá)陡善其生物學(xué)功能的研究院奇姓系業(yè)名婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科學(xué)邢&英指導(dǎo)教師：塑塹墨塑堡完成日期：!!Q至!旦!!旦中文摘要絨毛／蛻膜陽性率342％／316％，絨毛組織及蛻膜組織SOCSl、SOCS2、SOCS3基因多為中、低表達(dá)，SOCS蛋白表達(dá)特征與轉(zhuǎn)錄水平基本一致。SOCSl、SOCS2、SOCS3蛋白分布于絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞全層，散在分布于蛻膜問質(zhì)；滋養(yǎng)細(xì)胞和蛻膜細(xì)胞表達(dá)

2、的SOCS蛋白既可以分布在細(xì)胞漿內(nèi)，也可以分布在細(xì)胞核內(nèi)，或者兼而有之。(2)體外分離人早孕細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和蛻膜基質(zhì)細(xì)胞，予1％胎牛血清的DMEMF12培養(yǎng)14h，兩種細(xì)胞均表達(dá)SOCS2、SOCS3基因；同時(shí)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞分泌的IL10，高于同種細(xì)胞培養(yǎng)2h時(shí)的分泌水平(PO05)。(3)IL10(01ng／m1)可上調(diào)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜基質(zhì)細(xì)胞SOCS2、SOCS3基因表達(dá)。結(jié)論正常母胎界面表達(dá)SOCSl、SOCS2、SO

3、CS3，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和蛻膜基質(zhì)細(xì)胞自分泌和旁分泌IL10可能是母胎界面表達(dá)SOCS2、SOCS3的誘因之一，SOCS可能參與母胎界面免疫內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)的調(diào)節(jié)，進(jìn)一步研究SOCS的生物學(xué)功能將為了解復(fù)雜的妊娠機(jī)制提供有價(jià)值的信息。第二部分補(bǔ)腎益氣方促進(jìn)人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞SOCS3表達(dá)及其生長目的檢測補(bǔ)腎益氣方對原代培養(yǎng)人早孕細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及人滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤JAR細(xì)胞株SOCS3表達(dá)的調(diào)控，探討中藥促進(jìn)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞生長的作用機(jī)制。方法采用Pereoll

4、密度梯度離心法，分離純化人正常早孕細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定其純度；RTPCR法檢測細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞SOCS3基因表達(dá)；Westemblot檢測細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞SOCS3蛋白表達(dá)、STAT3活化及ERK磷酸化的變化；MTT法檢測人細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、JAR細(xì)胞株增殖活力；PCNA—PE單標(biāo)志流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞增殖情況、AnnexinVFITC／PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞早期凋亡；用SOCS3特異性的siRNA轉(zhuǎn)染JAR細(xì)胞，realtimePC

5、R等法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果，檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞ERKl／2的活化及STAT3的磷酸化；用SOCS3正義基因轉(zhuǎn)染JAR細(xì)胞，促進(jìn)SOCS3表達(dá)，PCNA—PE單標(biāo)志流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞增殖變化。結(jié)果(1)10％和20％牢b腎益氣方含藥血清呈濃度依賴性增強(qiáng)人正常早孕細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞增殖活力及PCNA表達(dá)：中藥對JAR細(xì)胞株有類似作用。1％胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞48h，AnnexinVFITCPI一細(xì)胞為3819a：745％，加入10％和20％中藥處理后，滋