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1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文共表達(dá)人NK4、B71復(fù)制缺陷型重組腺病毒的制備及體外功能鑒定姓名:石慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:陳德基20070525廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文共表達(dá)人NK4,B71復(fù)制缺陷型霞組腺病毒的制備及體外功能鑒定共表達(dá)人NK4、B7一l復(fù)制缺陷型重組腺病毒的制備及體外功能鑒定中文摘要研究背景原發(fā)性肝癌的基因治療是近年來(lái)的研究熱點(diǎn),但目前基因治療臨床療效遠(yuǎn)不如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果。造成這一區(qū)別的主要
2、原因在于腫瘤是一個(gè)多因素、多環(huán)節(jié)、多階段的復(fù)雜疾病,單一因素的糾正往往不能達(dá)到理想的抑制腫瘤效應(yīng)。旨在抑制腫瘤血管及增強(qiáng)機(jī)體腫瘤免疫的兩種單一療法的聯(lián)合是增強(qiáng)基因治療效果的新策略。B71作為共刺激因子對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤特異性CTL具有十分重要的作用。NK4是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的拮抗劑及強(qiáng)有力的腫瘤血管生成抑制劑。本研究擬將NK4基因及B71基因亞克隆至同一腺病毒載體,使之在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的同時(shí)激活產(chǎn)生更強(qiáng)的CTLs,從而發(fā)揮協(xié)同抗腫
3、瘤效應(yīng),并為下一步利用該載體進(jìn)行肝癌的復(fù)合基因治療奠定基礎(chǔ)。方法1、雙酶切pcDNA3/hNK4質(zhì)粒獲得NK4基因編碼區(qū)序列及設(shè)計(jì)雙引物PCR擴(kuò)增獲得B71基因編碼區(qū)序列及CMVPA片斷后,通過(guò)亞克隆技術(shù)構(gòu)建重組穿梭載體pAdTrack刪V/B7l倆vPA/NK4。雙酶切法及DNA測(cè)序鑒定重組載體的正確性。2、利用基因重組技術(shù)構(gòu)建含NK4及B71雙基因的重組腺病毒質(zhì)粒載體pAd—B7一1NK4。酶切法將pAdB7INK4線性化,脂質(zhì)體介
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