TNFAIP8在胃癌中表達的研究及臨床意義.pdf

1、胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一,是最常見的消化道惡性腫瘤。早期胃癌多無癥狀或僅有輕微癥狀。當有明顯不適就醫(yī)時,往往病變已屬中晚期。雖然胃癌發(fā)病的確切機制尚不完全清楚,但是環(huán)境因素、遺傳因素等調(diào)節(jié)機制在胃癌的癌前病變及腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中均處于重要的地位,免疫調(diào)節(jié)在胃癌的發(fā)病過程中也起著重要的作用。
　　 腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白8(Tumor necrosis factor-α induced protein-8,TNFAIP8,TI

2、PE)是調(diào)控凋亡過程的重要分子之一。隨著研究的不斷深入,TNFAIP8蛋白在細胞凋亡、信號傳導(dǎo)、腫瘤細胞增生、侵襲及轉(zhuǎn)移等生命過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用。TNFAIP8蛋白的多效應(yīng)性及TIPE2在維持機體免疫動態(tài)平衡中的調(diào)控作用預(yù)示著TNFAIP8家族在免疫學(xué)及醫(yī)學(xué)研究中可能極具應(yīng)用價值。
　　 按照起始caspase的不同,可將哺乳細胞的凋亡分為三種基本的途徑。一種稱為外在途徑,由細胞表面的死亡受體如Fas和腫瘤壞死因子受體家族

3、引發(fā);另一種稱為內(nèi)在途徑或線粒體途徑,由許多應(yīng)激條件、化學(xué)治療試劑和藥物所起始,第三種途徑是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所導(dǎo)致的caspase-12的活化,從而導(dǎo)致凋亡。為了研究TNFAIP8在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其免疫機制,本實驗首先構(gòu)建了TNFAIP8過表達質(zhì)粒,并用蛋白免疫印跡方法(western blot)技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法對構(gòu)建的TNFAIP8過表達質(zhì)粒進行了鑒定，然后從臨床獲取的胃癌病人手術(shù)切除的組織進行了檢測:利

4、用免疫組織化學(xué)方法檢測胃癌組織中TNFAIP8的表達;采用蛋白免疫印跡方法分析腫瘤組織中TNFAIP8蛋白水平的表達情況;并進一步利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法了解腫瘤組織和腫瘤細胞中TNFAIP8基因水平的表達情況。在獲得了TNFAIP8在腫瘤細胞和腫瘤組織中的表達基本情況后,通過培養(yǎng)人胃癌細胞系BGC823,將TNFAIP8過表達質(zhì)粒通過Lipofectin2000轉(zhuǎn)染到人胃癌細胞系BGC823,然后通過抗DR5單克隆抗體刺激后,采用蛋

5、白免疫印跡方法檢測天冬氨酸特異性的半光氨酸蛋白水解酶(caspase)的表達;并采用流式細胞儀技術(shù)分析轉(zhuǎn)染后的過表達TNFAIP8對胃癌細胞的凋亡和其周期的影響,進而探討TNFAIP8在胃癌形成中的作用。
　　 實驗通過發(fā)現(xiàn)胃癌患者腫瘤組織中TNFAIP8的mRNA水平和蛋白水平的表達量都與胃癌的分化和分期密切相關(guān),TNFAIP8在低分化和進展期胃癌中的表達明顯高于中分化和早期胃癌;為進一步研究TNFAIP8和胃癌之間的關(guān)系,在

6、此研究基礎(chǔ)上,本實驗構(gòu)建了TNFAIP8過表達質(zhì)粒,并送公司測序鑒定。然后通過轉(zhuǎn)染人胃癌細胞系BGC823,并用antiDR5mAb刺激,通過流式細胞儀分析胃癌細胞轉(zhuǎn)染前后的凋亡和周期的變化,發(fā)現(xiàn)過表達的TNFAIP8減少了胃癌細胞的凋亡,延長了胃癌細胞周期的S期,促進胃癌細胞的有絲分裂,進而促進了胃癌細胞的增殖。為進一步探討過表達的TNFAIP8在胃癌形成中的作用,同樣通過上述的方法,檢測蛋白caspase-8、caspase-9和c

7、aspase-3的表達在轉(zhuǎn)染前后的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)酶原的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白的表達在轉(zhuǎn)染前后無明顯的差異,而活化的caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白的表達在轉(zhuǎn)染后較轉(zhuǎn)染前明顯減少,從而可以解釋過表達的TNFAIP8通過線粒體細胞凋亡通路負性調(diào)控胃癌細胞的凋亡。據(jù)以上的研究結(jié)果,我們得出以下結(jié)論:在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中,TNFAIP8的表達可能發(fā)揮一定的作用,TNFAIP