榛花中抑制金黃色葡萄球菌化合物的篩選及抑菌機制研究.pdf

1、榛花(Corylus heterophylla Flowers),為樺木科榛屬植物榛和川榛及毛榛的雄花。榛花具有止血、消炎、降血糖和抗氧化等作用,被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)。如“復(fù)方榛花舒肝膠囊”、“解毒通絡(luò)保腎膠囊”等。目前對于榛花上述活性的藥理學(xué)機理尚不十分清楚。本文首次對榛花中的抑菌活性進行了系統(tǒng)研究,在活性引導(dǎo)下對具有抑菌活性的化合物進行分離和純化,并對活性化合物的抑菌機制進行了初步研究。本研究為深入揭示榛花的藥物學(xué)作用,以及揭示榛花

2、發(fā)揮抗菌作用的藥理學(xué)機制奠定了基礎(chǔ)。
　　 本文采用95％乙醇回流提取法對榛花藥材進行提取。利用萃取法對榛花提取物進行初步分離,分離得到石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、飽和正丁醇相和水相。應(yīng)用牛津杯法對各萃取相進行抑菌實驗,其中乙酸乙酯相抑菌圈直徑最大,抑菌效果最好。乙酸乙酯相通過硅膠柱層析法進一步被分離得109個組分(ZF1-ZF109),濾紙片法測定硅膠柱層析產(chǎn)物的抑菌活性,確定3個具有抑菌活性的組分(ZF15,ZF34,

3、ZF75)。利用制備型高效液相色譜法對3個活性組分進行活性單體成分的分離。分析型高效液相色譜對活性單體物質(zhì)進行純度測定,3個單體化合物的純度分別達到98.9％,98.2％,99.2％。聯(lián)合應(yīng)用液-質(zhì)、核磁共振波譜法最終確定3個活性物質(zhì)分別為hirsutanone,hirsutanonol,keampferol-3-O-α-L-(4"-E-P-coumaroyl)-rhamnoside(KCR)。這三個化合物均首次從榛花中提取獲得。

4、>　　 通過2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色研究榛花中活性成分對金黃色葡萄球菌的抑菌作用。結(jié)果表明hirsutanone,hirsutanonol,KCR對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度分別為0.008mg／ml,0.008mg／ml,0.02mg／ml。細胞膜完整性測定結(jié)果表明上述化合物均能破壞金黃色葡萄球菌細胞膜的完整性。SDS-PAGE蛋白含量變化分析顯示hirsutanone和hirsutanonol作用20h后,可溶

5、性蛋白總量較對照組分別減少10.5％,6.43％；KCR作用20h后部分可溶性蛋白減少,25kD左右的譜帶蛋白較對照組增加47.6％。
　　 通過對上述三種化合物廣譜抑菌作用的研究表明hirsutanone,hirsutanonol對金黃色葡萄球菌、臘狀芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、單增李斯特菌、白色念珠菌、大腸桿菌、變形桿菌、藤黃微球菌均有不同程度的抑制作用。KCR對金黃色葡萄球菌、臘狀芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、大腸桿菌