失血性休克后腸系膜淋巴液對(duì)中性粒細(xì)胞活化作用以及高滲氯化鈉復(fù)蘇對(duì)其的影響.pdf

1、內(nèi)臟缺血再灌注被認(rèn)為是引起失血性休克后多臟器功能衰竭(Multipleorganfailure，MOF)的核心病因，但機(jī)理不清。二十世紀(jì)五十年代，腸源性內(nèi)毒素的吸收以及肝臟解毒功能的減退被認(rèn)為是不可逆休克的基礎(chǔ)，到了二十世紀(jì)八十年代，為了證實(shí)這個(gè)統(tǒng)一的概念經(jīng)門靜脈途徑的腸道細(xì)菌移位成為研究的焦點(diǎn)。腸道屏障破壞后腸道內(nèi)毒素和細(xì)菌的移位被認(rèn)為是休克后全身感染和MOF發(fā)展的主要原因。有關(guān)腸道損傷與其后續(xù)的感染和遠(yuǎn)處臟器衰竭之間關(guān)系的證據(jù)不斷地

2、增多。然而有關(guān)創(chuàng)傷病人的臨床研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示在腸系膜缺血再灌注誘導(dǎo)的MOF的動(dòng)物模型中，不能確定腸道細(xì)菌移位在失血性休克后MOF中的作用，還有在嚴(yán)重創(chuàng)傷后發(fā)展為MOF的患者中不能在門靜脈血中檢測(cè)到毒素或細(xì)菌。另外各種原因引起的MOF其發(fā)展基本遵循一個(gè)可預(yù)見(jiàn)的順序，由肺開(kāi)始到其他器官的衰竭，而肺是首個(gè)接納腸系膜淋巴液的器官，對(duì)這些現(xiàn)象一種可能的解釋就是在腸道缺血的情況下可以誘導(dǎo)腸道相關(guān)的淋巴組織產(chǎn)生和分泌相關(guān)的因子，這樣即使門脈中沒(méi)有細(xì)

3、菌也可以由腸源性淋巴途經(jīng)而致遠(yuǎn)處器官損害。 嚴(yán)重創(chuàng)傷及多臟器功能衰竭患者中存在大量活化的中性粒細(xì)胞、活化的中性粒細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞表面整合素CD11b/CD18的表達(dá)，與內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子ICAM-1結(jié)合并相互作用，通過(guò)產(chǎn)生超氧化物使毛細(xì)血管內(nèi)皮完整性喪失、組織水腫，導(dǎo)致急性肺損傷、急性呼吸窘迫綜合癥，甚至MOF?；罨闹行粤＜?xì)胞在創(chuàng)傷失血后多臟器功能衰竭病理過(guò)程中被認(rèn)為是主要的介體。因此為了確定腸系膜淋巴液與休克后MOF之間的聯(lián)系，就

4、必須研究其對(duì)中性粒細(xì)胞的作用。 用7.5％高滲氯化鈉復(fù)蘇失血性休克在臨床上得到了肯定，高滲氯化鈉能快速產(chǎn)生復(fù)蘇作用、迅速有效地逆轉(zhuǎn)低灌注狀態(tài)、改善失血性休克患者的血流動(dòng)力學(xué)狀態(tài)，且在一定時(shí)間內(nèi)維持平穩(wěn)。同時(shí)基礎(chǔ)研究顯示用7.5％高滲氯化鈉復(fù)蘇失血性休克，能恢復(fù)小腸的血流量，從而有效防治小腸粘膜屏障損害、細(xì)菌移位，能抑制內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間黏附分子，能減輕肺損傷或多臟器功能衰竭。然而高滲氯化鈉復(fù)蘇失血性休克對(duì)腸系膜淋巴液的上述作用又

5、有何影響? 本研究將結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞分析等方法，探索與驗(yàn)證失血性休克后腸系膜淋巴液對(duì)中性粒細(xì)胞的活化作用以及高滲氯化鈉復(fù)蘇對(duì)其的影響，以期發(fā)現(xiàn)和探討失血性休克后腸系膜淋巴液與臟器功能衰竭的內(nèi)在聯(lián)系，為臨床預(yù)防和干預(yù)失血性休克后多臟器功能的衰竭發(fā)生和發(fā)展提供研究平臺(tái)和理論依據(jù)。 第一部分失血性休克后鼠中性粒細(xì)胞的活化將48只健康成年雄性SD鼠隨機(jī)分為8組：對(duì)照組、不復(fù)蘇的假休克組、乳酸林格氏液復(fù)蘇的休克組/假休克組、7.

6、5％高滲氯化鈉復(fù)蘇的休克組/假休克組、血液復(fù)蘇的休克組/假休克組。每組6只。對(duì)照組：行麻醉、股動(dòng)脈置管但不剖腹、不放血、不復(fù)蘇。不復(fù)蘇的假休克組：行麻醉、股動(dòng)脈、頸內(nèi)靜脈置管及剖腹但不放血、不復(fù)蘇。不同液體復(fù)蘇的休克組：行麻醉、股動(dòng)脈、頸內(nèi)靜脈置管及剖腹，于股動(dòng)脈放血使平均動(dòng)脈壓降至40mmHg維持90分鐘。從頸內(nèi)靜脈分別輸入3倍于失血量的乳酸林格氏液、0.364倍于失血量的7.5％高滲氯化鈉溶液及相同量的血液(每組復(fù)蘇液含鈉量相同)；

7、相應(yīng)液體復(fù)蘇的假休克組不放血但輸相應(yīng)劑量的不同液體，均復(fù)蘇兩小時(shí)。監(jiān)測(cè)并記錄不同液體復(fù)蘇后平均動(dòng)脈壓的水平，并于放血前、休克末、復(fù)蘇第1小時(shí)末及第2小時(shí)末從股動(dòng)脈抽全血用流式細(xì)胞儀測(cè)定中性粒細(xì)胞CD11b和CD18的表達(dá)。結(jié)果表明：失血性休克后血壓下降，液體復(fù)蘇后血壓基本可恢復(fù)至休克前水平，高滲氯化鈉復(fù)蘇休克鼠后平均動(dòng)脈壓雖低，但與乳酸林格氏液、血復(fù)蘇休克組的平均動(dòng)脈壓差別無(wú)顯著意義(P＞0.05)；乳酸林格氏液復(fù)蘇的假休克組復(fù)蘇后平均

8、動(dòng)脈壓升高，但與其他組比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。不同液體復(fù)蘇的假休克組、不復(fù)蘇的假休克組及對(duì)照組中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)水平無(wú)顯著變化。不同液體復(fù)蘇的休克組在休克末中性粒細(xì)胞CD11b和CD18的表達(dá)均有顯著性增高(P＜0.05)。與相應(yīng)的休克末比，乳酸林格氏液復(fù)蘇休克鼠后中性粒細(xì)胞CD11b和CD18的表達(dá)顯著增高(P＜0.05)；而高滲鈉復(fù)蘇休克鼠后中性粒細(xì)胞CD18的表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，血復(fù)蘇休克鼠后中性

9、粒細(xì)胞CD11b和CD18的表達(dá)顯著降低(P＜0.05)。 第二部分休克后中性粒細(xì)胞的活化是通過(guò)淋巴途經(jīng)(一)結(jié)扎腸系膜淋巴管對(duì)中性粒細(xì)胞活化的作用將36只健康成年雄性SD鼠隨機(jī)分為6組：(休克前)先結(jié)扎淋巴管的休克組/假休克組、不結(jié)扎淋巴管的休克組/假休克組，以及復(fù)蘇前結(jié)扎淋巴管的休克組/假休克組。每組6只。(休克前)先結(jié)扎淋巴管的休克組：先將腸系膜淋巴管結(jié)扎后放血休克。復(fù)蘇前結(jié)扎淋巴管的休克組：先放血休克后結(jié)扎腸系膜淋巴管。

10、不結(jié)扎淋巴管的休克組：不結(jié)扎淋巴管放血休克。對(duì)應(yīng)的假休克組不放血但做相應(yīng)的淋巴管處理，均用3倍于失血量乳酸林格氏液復(fù)蘇兩個(gè)小時(shí)。于放血前、休克末、復(fù)蘇第1小時(shí)末及第2小時(shí)末從股動(dòng)脈抽全血流式測(cè)定中性粒細(xì)胞CD11b和CD18的表達(dá)。 (二)休克后腸系膜淋巴液直接對(duì)鼠中性粒細(xì)胞的活化作用18只健康成年雄性SD鼠隨機(jī)分為3組：不復(fù)蘇的假休克組、乳酸林格氏液復(fù)蘇的休克組/假休克組。每組6只。不復(fù)蘇的假休克組：行麻醉、股動(dòng)脈、頸內(nèi)靜脈置

11、管及剖腹引流腸系膜淋巴但不放血、不復(fù)蘇。休克組：行麻醉、股動(dòng)脈、頸內(nèi)靜脈置管及剖腹引流腸系膜淋巴再放血休克，對(duì)應(yīng)的假休克組收集淋巴液但不放血，均用3倍于失血量乳酸林格氏液復(fù)蘇兩個(gè)小時(shí)。收集放血前1小時(shí)、復(fù)蘇1小時(shí)的淋巴液。用不同時(shí)段收集到的淋巴液作用于未作過(guò)任何處理的鼠全血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD11b、CD18的表達(dá)及過(guò)氧化物的形成(呼吸爆發(fā)試驗(yàn))。 (三)休克后門靜脈血漿直接對(duì)鼠中性粒細(xì)胞的活化作用18只雄性SD鼠同

12、前分為3組，三組同前處理后不收集淋巴液，但均收集放血前、復(fù)蘇1小時(shí)末的門靜脈血漿。用不同時(shí)間收集到的門靜脈血漿作用于未作過(guò)任何處理鼠的全血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD11b、CD18的表達(dá)及過(guò)氧化物的形成(呼吸爆發(fā)試驗(yàn))。 結(jié)果在各個(gè)假休克組中無(wú)論淋巴管結(jié)扎與否中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明結(jié)扎淋巴管本身不會(huì)引起中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)的變化。與不結(jié)扎淋巴管的休克組比較，(休

13、克前)先結(jié)扎淋巴管的休克組在休克末和復(fù)蘇期的中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)顯著降低(P＜0.05)；說(shuō)明休克前結(jié)扎淋巴管可以阻止休克及復(fù)蘇后中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)的增高。與不結(jié)扎淋巴管的休克組比較，復(fù)蘇前結(jié)扎淋巴管的休克組在復(fù)蘇期中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)也有顯著降低(P＜0.05)，說(shuō)明復(fù)蘇前結(jié)扎淋巴管可以降低復(fù)蘇后的中性粒細(xì)胞CD11b及CD18表達(dá)的增高。 與休克前淋巴液、各假休克淋巴液、各門靜脈血

14、漿比，休克后淋巴液作用于中性粒細(xì)胞后CD11b及CD18的表達(dá)增高(P＜0.05)；而各假休克淋巴液與各假休克門靜脈血漿誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞CD11b及CD18的表達(dá)無(wú)顯著差別(P＞0.05)；休克后門靜脈血漿與休克前門靜脈血漿及各假休克門靜脈血漿誘導(dǎo)粒細(xì)胞CD11b及CD18的表達(dá)也無(wú)顯著差別(P＞0.05)。休克后腸系膜淋巴液及門靜脈血漿對(duì)鼠中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)試驗(yàn)的作用也取得與上述相一致的結(jié)果。 第三部分高滲氯化鈉復(fù)蘇對(duì)腸系膜淋巴

15、液活化中性粒細(xì)胞的影響42只健康成年雄性SD鼠隨機(jī)分為7組：不復(fù)蘇的假休克組、乳酸林格氏液復(fù)蘇的休克組/假休克組、7.5％高滲氯化鈉復(fù)蘇的休克組/假休克組、血液復(fù)蘇的休克組/假休克組。每組6只。同前二部分實(shí)驗(yàn)收集各組放血前1小時(shí)、復(fù)蘇第1小時(shí)及復(fù)蘇第2小時(shí)的淋巴液。監(jiān)測(cè)不同組休克前后腸系膜淋巴液引流量的變化。用復(fù)蘇2小時(shí)的淋巴液作用于正常人及未作過(guò)任何處理鼠的全血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD11b、CD18的表達(dá)及過(guò)氧化物的形成(呼

16、吸爆發(fā)試驗(yàn))。結(jié)果與相應(yīng)的假休克組比，不同液體復(fù)蘇休克鼠后淋巴液引流量顯著高(P＜0.05)；與乳酸林格氏液復(fù)蘇休克比，高滲鈉復(fù)蘇休克組與血復(fù)蘇休克組復(fù)蘇后淋巴液引流量顯著減少(P＜0.05)。與相應(yīng)的假休克復(fù)蘇后的腸系膜淋巴液比，乳酸林格氏液復(fù)蘇休克鼠后的腸系膜淋巴液可以使鼠和人的中性粒細(xì)胞CD11b、CD18表達(dá)增加(P＜0.05)；而高滲氯化鈉、血復(fù)蘇休克鼠后的腸系膜淋巴液誘導(dǎo)鼠或人中性粒細(xì)胞CD11b、CD18的表達(dá)無(wú)顯著增加(

17、P＞0.05)；與乳酸林格氏液復(fù)蘇休克鼠后的腸系膜淋巴液比，高滲氯化鈉、血復(fù)蘇休克鼠后的腸系膜淋巴液誘導(dǎo)鼠或人中性粒細(xì)胞CD11b、CD18的表達(dá)能力均顯著降低(P＜0.05)。在誘導(dǎo)人或鼠中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)試驗(yàn)中取得了與上述相同的結(jié)果。 結(jié)論創(chuàng)傷出血性休克活化中性粒細(xì)胞，結(jié)扎淋巴管可明顯降低或阻止休克鼠體內(nèi)中性粒細(xì)胞的活化；創(chuàng)傷性失血性休克后腸系膜淋巴液能活化中性粒細(xì)胞，創(chuàng)傷性失血性休克后門靜脈血漿不能活化中性粒細(xì)胞，中性粒細(xì)

18、胞的活化是通過(guò)淋巴途徑而非門靜脈途徑。 高滲氯化鈉復(fù)蘇休克能抑制鼠體內(nèi)中性粒細(xì)胞的活化，減少?gòu)?fù)蘇后腸系膜淋巴液的形成，降低腸系膜淋巴液活化中性粒細(xì)胞的能力，高滲氯化鈉可免疫調(diào)理(下調(diào))中性粒細(xì)胞的活化。 Posthemorrhagicshockmesentericlymphprimesneutrophilsandtheeffectofhypertonicsalineresuscitationonneutrophilact