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1、重度失血性休克引起的急性腎損傷(acute kidney injury,AKI)如不能及時(shí)糾正,則進(jìn)一步引起多器官功能障礙綜合征(multiple organdysfunction syndrome,MODS)甚至多器官衰竭(multiple organ failure,MOF),是重癥休克患者死亡的重要原因之一?,F(xiàn)在有大量的研究證據(jù)表明:通過(guò)腸淋巴管(mesenteric lymph duct,MLD)結(jié)扎或?qū)⑿菘四c淋巴液引流至體外的
2、措施,均可以達(dá)到減輕失血性休克后的AKI,由此可見(jiàn)經(jīng)過(guò)腸淋巴途徑的腸源性感染在重癥休克后的AKI中發(fā)揮著重要作用。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiontensin-aldosterone system,RAAS)是人體內(nèi)及其關(guān)鍵的體液調(diào)節(jié)系統(tǒng),調(diào)節(jié)水和鹽的代謝,調(diào)節(jié)心臟以及腎臟功能,維持血容量和血管張力,它廣泛存在于與循環(huán)系統(tǒng)相關(guān)的血管、心臟以及中樞系統(tǒng)、腎臟、腎上腺等組織器官中。目前的研究表明,RAAS有兩條關(guān)鍵軸:
3、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin converting enzyme,ACE)-血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)-血管緊張素Ⅱ-1型受體(angiotensinⅡ1receptor,AT1R)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(angiotensin converting enzyme2,ACE2)-血管緊張素(1-7)[angiotensin(1-7),Ang(1-7)]-Mas受體(Mas receptor,MasR)。
4、其中,ACE2裂解AngⅡ生成Ang(1-7),激活MasR發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用。因此,ACE2-Ang(1-7)-MasR軸被認(rèn)為是ACE-AngⅡ-AT1R的反向調(diào)節(jié)軸,二者共同調(diào)節(jié)RAAS平衡。那么在失血性休克引起AKI的過(guò)程中,腎組織ACE和ACE2的平衡狀態(tài)如何?腸淋巴液引流對(duì)腎組織ACE和ACE2的平衡有何作用?值得研究。
為了探討休克腸淋巴液引流對(duì)失血性休克小鼠腎組織ACE/ACE2平衡的作用。本實(shí)驗(yàn)選用24只雄性B
5、ALB/c小鼠,隨機(jī)分為四組:對(duì)照組、假手術(shù)組、休克組、休克腸淋巴液引流組。小鼠經(jīng)麻醉后,用注射器經(jīng)右股動(dòng)脈注射肝素鈉后,插管將其連接到用于監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈血壓(mean anery pressure,MAP)的生物信號(hào)采集系統(tǒng);左股動(dòng)脈連接注射器將其固定于抽注機(jī)上以備放血;剝離與腸系膜上動(dòng)脈相伴行的MLD;手術(shù)結(jié)束穩(wěn)定30 min后,左股動(dòng)脈放血,10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中維持MAP在(40±2)mmHg水平;維
6、持低血壓1h后,將林格氏液與放出的全血1∶1混勻經(jīng)左股動(dòng)脈輸液復(fù)蘇,于30 min完成;輸液結(jié)束后繼續(xù)觀察6h。休克組以及休克腸淋巴液引流組按上述方法復(fù)制失血性休克模型,休克腸淋巴液引流組在輸液完成后立即行MLD插管,引流腸淋巴液。假手術(shù)組僅進(jìn)行相同的操作,不放血、不輸液,觀察至相對(duì)應(yīng)的時(shí)間。對(duì)照組麻醉后直接取材。留取左腎,-80℃保存,制備組織勻漿,ELISA方法檢測(cè)腎臟組織中AngⅡ和Ang(1-7)含量;留取右腎,-80℃保存,Q
7、RT-PCR法檢測(cè)ACE mRNA、ACE2 mRNA、AT1R mRNA、Mas1R mRNA表達(dá)。
結(jié)果發(fā)現(xiàn),假手術(shù)組小鼠腎組織ACE mRNA、AngⅡ、AT1RmRNA均高于對(duì)照組;休克組小鼠腎組織ACE mRNA、AngⅡ、AT1RmRNA均顯著高于對(duì)照組、假手術(shù)組;腸淋巴液引流組小鼠腎組織ACE mRNA、AngⅡ、AT1R mRNA顯著低于休克組,但仍高于對(duì)照組、假手術(shù)組。假手術(shù)組小鼠腎組織ACE2 mRNA、A
8、ng(1-7)、Mas1RmRNA均低于對(duì)照組,但ACE2 mRNA更為顯著;休克組小鼠腎組織ACE2 mRNA、Ang(1-7)、Mas1R mRNA均顯著低于對(duì)照組,其中ACE2mRNA和Mas1R mRNA顯著低于假手術(shù)組;腸淋巴液引流顯著升高了休克組小鼠腎組織ACE2 mRNA、Ang(1-7)、Mas1R mRNA,但仍低于對(duì)照組、假手術(shù)組。假手術(shù)組小鼠腎組織中ACE/ACE2高于對(duì)照組;休克組小鼠腎組織中ACE/ACE2顯著
9、高于對(duì)照組、假手術(shù)組;腸淋巴液引流組小鼠腎組織ACE/ACE2比值顯著低于休克組,但仍顯著高于對(duì)照組、假手術(shù)組。
研究結(jié)果表明:失血性休克后腎組織ACE-AngⅡ-AT1R軸表達(dá)上調(diào)、ACE2-Ang(1-7)-MasR軸表達(dá)下調(diào);腸淋巴液引流調(diào)節(jié)了失血性休克小鼠腎組織ACE/ACE2的平衡。研究結(jié)果補(bǔ)充并完善了“AKI的腸淋巴途徑學(xué)說(shuō)”,為以淋巴液為靶點(diǎn),調(diào)節(jié)ACE/ACE2平衡,為失血性休克后AKI的臨床防治提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)
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