硫化氫在腸淋巴液引流減輕失血性休克大鼠多器官損傷中的作用與機(jī)制.pdf

1、大量研究表明，腸淋巴管結(jié)扎或腸淋巴液引流可減輕失血性休克后多器官的功能障礙與結(jié)構(gòu)損傷，經(jīng)淋巴途徑的腸源性感染是重癥休克后器官損傷的重要因素;氣體信號(hào)分子硫化氫(hydrogen sulfide，H2S)加劇了失血性休克后的炎癥反應(yīng)，抑制H2S合成可降低器官損傷的程度。但在休克腸淋巴液介導(dǎo)器官損傷的這一過程中，H2S是否發(fā)揮作用，其具體作用機(jī)制如何？尚不清楚。
　　為此，本研究應(yīng)用胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine-γ-

2、lyase，CSE）抑制劑D，L-炔丙基甘氨酸(D，L-propargylglycine，PPG)和H2S供體硫氫化鈉(sodium hydrosulfide hydrate，NaHS)作用于行腸淋巴液引流的大鼠，觀察H2S對(duì)腸淋巴液引流改善器官功能與結(jié)構(gòu)以及Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)、白介素10(interleukin10, IL-10)、IL-12、腫瘤壞死因子α（tumor necrosi

3、s factorα，TNFα）含量的影響，探討H2S在腸淋巴液引流減輕休克大鼠器官損傷中的作用與機(jī)制。
　　雄性Wistar大鼠30只隨機(jī)均分為:假手術(shù)組（Sham）、休克組(Shock)、休克+引流組(Shock+drainage)、休克+引流+PPG組(Shock+drainage+PPG)、休克+引流+NaHS組(Shock+drainage+NaHS)。放血前30 min，休克+引流+PPG組、休克+引流+NaHS組腹腔分

4、別注射PPG(45 ml.kg-1)、NaHS(28μmol.kg-1);其它三組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水(1 ml.kg-1)。所有大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉肌肉注射麻醉后，行股部手術(shù)，右股靜脈注射肝素鈉全身抗凝，右股動(dòng)脈插管連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)，連續(xù)監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈血壓(mean arterypressure，MAP);左股側(cè)動(dòng)脈插管后連接注射器固定于抽注機(jī)上備放血用;腹部手術(shù)，剝離腸系膜淋巴管。待所有手術(shù)完成、穩(wěn)定30 min后，休克組、休克

5、+引流組、休克+引流+PPG組、休克+引流+NaHS組大鼠經(jīng)左股動(dòng)脈勻速放血，10 min內(nèi)將MAP降至40 mmHg，復(fù)制失血性休克模型。維持低血壓60 min后，將放出的全血與林格氏液按1∶1混勻，經(jīng)右側(cè)股靜脈輸液復(fù)蘇，30 min完成;觀察至輸液結(jié)束后3h。假手術(shù)組進(jìn)行相同的手術(shù)操作，但不放血、不輸液。休克+引流組、休克+引流+PPG組、休克+引流+NaHS組在輸液結(jié)束后，行腸系膜淋巴管插管，引流休克腸淋巴液至休克3h。
　

6、　各組大鼠在相當(dāng)于輸液結(jié)束后3h這一時(shí)間點(diǎn)，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，制各血漿，檢測(cè)反映心肌細(xì)胞損傷的指標(biāo)肌酸激酶同工酶(creatinephosphokinase isoenzyme，CK-MB)與乳酸脫氫酶-1(lactic aciddehydrogenase-1，LDH-1)、反映肝功能的指標(biāo)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase

7、，ALT)與總膽汁酸(total bile acid，TBA)、反映腎功能的指標(biāo)尿素(Urea)、肌酐(Cre)，以及總蛋白、H2S含量。取肺左葉，制備支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)以及蛋白檢測(cè)，計(jì)算肺通透性指數(shù)(lung permeabilityindex，LPI)，同時(shí)取右肺上葉，測(cè)定肺干/濕(D/W)比。留取固定位置的肺、心肌、肝、腎組織，部分經(jīng)多聚甲醛固定用于

8、觀察組織形態(tài)學(xué)變化;另一部分制備組織勻漿用于檢測(cè)H2S含量、CSE活性以及TLR4、IL-10、IL-12、TNFα的含量。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腸淋巴引流可提高失血性休克大鼠液體復(fù)蘇后一些時(shí)間點(diǎn)的MAP，盡管PPG沒有明顯的作用，但NaHS降低了腸淋巴引流對(duì)MAP的提升作用。組織形態(tài)學(xué)觀察表明，假手術(shù)組大鼠肺、心肌、肝、腎組織結(jié)構(gòu)基本正常，休克組大鼠肺、心肌、肝組織出現(xiàn)了形態(tài)學(xué)損傷，休克+引流組與休克+引流+PPG組大鼠肺、心肌、肝、

9、腎的組織損傷較輕，NaHS加重了各器官的損傷程度。休克組大鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)、LPI顯著高于假手術(shù)組，休克+引流組BALF中細(xì)胞總數(shù)、LPI顯著低于休克組，休克+引流+PPG組BALF中細(xì)胞總數(shù)、LPI顯著低于休克+引流組，休克+引流+NaHS組BALF細(xì)胞總數(shù)、LPI顯著高于休克+引流組;而大鼠肺組織的D/W比出現(xiàn)了相反的變化。同時(shí)可見，休克組大鼠血漿AST、ALT、TBA、LDH-1、CK-MB、Urea、Cre均顯著高于假手術(shù)組

10、，休克+引流組大鼠血漿的AST、ALT、TBA、Urea、Cre含量顯著低于休克組，休克+引流+PPG組血漿AST、ALT、TBA、Cre水平顯著低于休克+引流組，休克+引流+NaHS組血漿AST、ALT、Urea、Cre含量顯著高于休克+引流組。
　　同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)，休克組血漿以及肺、肝、腎、心肌組織的H2S含量均顯著升高，腸淋巴液引流顯著降低了休克大鼠血漿以及肺、肝、腎、心肌組織H2S的含量，PPG進(jìn)一步降低了休克+引流組大鼠

11、這些組織H2S的含量，H2S供體NaHS則提高了休克+引流組大鼠的血漿以及肺、肝、腎、心肌組織H2S的含量。進(jìn)一步的研究結(jié)果顯示，休克組大鼠肺、肝、腎、心肌組織的TLR4、IL-10、IL-12、TNFα含量均顯著升高，腸淋巴液引流則降低了肝勻漿IL-10、肺、肝勻漿IL-12含量以及肺、肝、腎、心肌組織的TNFα含量;休克+引流組大鼠給予CSE抑制劑PPG后，進(jìn)一步降低了各器官組織的TLR4含量，肺、腎、心肌IL-10含量、肺組織IL

12、-12含量、肺、肝、腎、心肌的TNFα含量均顯著下降;H2S供體NaHS在增加休克+引流組大鼠肺、肝、腎、心肌的TLR4含量的同時(shí)，增加了肺、肝、腎組織IL-10、IL-12以及肺、肝、腎、心肌的TNFα含量。
　　研究結(jié)果表明，H2S在休克腸淋巴液引流減輕肺、肝、心、腎等重要器官的功能障礙及結(jié)構(gòu)損傷中起負(fù)面作用，其作用機(jī)制與TLR4引起的炎癥反應(yīng)加重有關(guān)。研究結(jié)果補(bǔ)充完善了“多器官損傷的腸淋巴途徑學(xué)說”，為以淋巴為靶點(diǎn)，針對(duì)H2