芍藥愈瘍湯對(duì)大鼠胃潰瘍治療作用的機(jī)理研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過檢測(cè)胃潰瘍(GU)大鼠模型潰瘍指數(shù)(UI)、細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)等指標(biāo)的變化及對(duì)胃粘膜上皮凋亡細(xì)胞的觀察，探討其對(duì)GU大鼠粘膜再生和愈合功能的影響，并用純中藥復(fù)方制劑芍藥愈瘍湯進(jìn)行干預(yù)，同時(shí)以中成藥胃蘇顆粒做對(duì)照，觀察芍藥愈瘍湯對(duì)乙酸致大鼠胃潰瘍治療的作用機(jī)理及對(duì)胃粘膜上皮細(xì)胞原位凋亡的影響，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：清潔級(jí)SD雄性大鼠80只，體重200±20g，置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，室溫22℃

2、～24℃。隨機(jī)取出20只大鼠，作為空白對(duì)照組，不造模，正常喂養(yǎng)。其余60只大鼠按照Takagi的方法于胃竇部前壁漿膜下近肌層處注射100％冰乙酸10μl復(fù)制GU模型。 GU模型復(fù)制成功后，將GU模型大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組(簡稱模型組)、胃蘇顆粒組(簡稱WS組)、芍藥愈瘍湯組(簡稱SYYY組)3組，每組20只。 造模后3d開始用藥干預(yù)。大鼠劑量按動(dòng)物體表面積以成人用量折合，200g大鼠每日用量為成人劑量的0.036倍。芍藥

3、愈瘍湯(白芍、柴胡、木香、砂仁、白術(shù)、蒲公英、丹參、白及、烏賊骨、元胡、三七、甘草等)按以一定比例混合后，按湯劑的要求水煎后濃縮，每毫升含中藥2.7g。SYYY成人每日量為27g，則大鼠每日量為0.972g/200g，WS組成人每日量為15g，則大鼠每日量為0.54g/200g體重，容量均為2ml，用蒸餾水稀釋，每日1次灌胃，空白組和模型組灌等容量的生理鹽水，連續(xù)灌胃7d和14d之后觀察。 各組在停藥24h后，斷頸處死大鼠，打開

4、腹腔，結(jié)扎賁門和幽門后將鼠胃取出，沿胃大彎切開胃，生理鹽水沖洗干凈后，放入4％中性甲醛溶液中固定1h取出。將胃平攤固定在小木板上，胃粘膜面朝上，測(cè)定潰瘍大小，計(jì)算潰瘍指數(shù)(UI)。取潰瘍周圍組織切成0.5cm×1cm左右的小塊，再回置于4％中性甲醛溶液中固定15h。常規(guī)脫水，石蠟包埋，制備5mm厚連續(xù)切片。運(yùn)用HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察潰瘍部組織結(jié)構(gòu)，TUNEL法檢測(cè)原位細(xì)胞凋亡，電子顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞并計(jì)數(shù)，計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)AI。

5、 結(jié)果： 1一般狀態(tài)觀察 造模組大鼠于注射100％冰乙酸3天后開始出現(xiàn)食欲下降、活動(dòng)減少、四肢無力、蜷臥嗜睡、行動(dòng)遲緩、毛發(fā)蓬松不榮，。正常對(duì)照組則健康如初，未見任何異常。 2芍藥愈瘍湯對(duì)GU大鼠潰瘍指數(shù)的影響 結(jié)果顯示，模型組7天后的潰瘍指數(shù)為(5.31±0.69)，14天后的潰瘍指數(shù)為(4.13±0.72)；WS組7天后的潰瘍指數(shù)為(2.75±0.55)，14天后的潰瘍指數(shù)為(1.96±0.42)；

6、SYYY組7天后的潰瘍指數(shù)為(1.67±0.48)，14天后的潰瘍指數(shù)為(0.80±0.42)。SYYY組、WS組與模型組相比有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；SYYY組與WS組相比有顯著性差異(P＜0.05)；SYYY組與空白組相比UI無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。各組間14天后的潰瘍指數(shù)較7天后的潰瘍指數(shù)均明顯縮小，有顯著性差異(P＜0.05)。 3芍藥愈瘍湯對(duì)GU大鼠胃組織一般形態(tài)學(xué)的影響 結(jié)果顯示，光學(xué)

7、顯微鏡觀察，空白組胃組織形態(tài)結(jié)構(gòu)規(guī)則，無白細(xì)胞浸潤，胃腺體結(jié)構(gòu)完整；模型組可見典型的胃潰瘍組織結(jié)構(gòu)，潰瘍深入至肌層，有的甚至穿透肌層達(dá)到漿膜層，周邊有許多壞死組織，炎性細(xì)胞浸潤明顯，潰瘍邊緣粘膜腺體間質(zhì)充血水腫，粘膜上皮細(xì)胞無增殖，潰瘍底部肉芽組織結(jié)構(gòu)紊亂，胃腺體和毛細(xì)血管少見；SYYY組潰瘍部周邊上皮細(xì)胞移行到肉芽組織表面，覆蓋了潰瘍底部，部分胃腺體重建，部分呈囊狀擴(kuò)張。胃粘膜層、肌層和漿膜層結(jié)構(gòu)清晰，粘膜層有少量白細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管

8、網(wǎng)數(shù)量減少；WS顆粒組潰瘍部周邊炎癥浸潤，上皮細(xì)胞增殖，潰瘍已深入肌層，底部肉芽組織結(jié)構(gòu)紊亂，胃腺體囊狀擴(kuò)張，可見毛細(xì)血管網(wǎng)再生。 4芍藥愈瘍湯對(duì)GU大鼠胃組織細(xì)胞凋亡的影響 4.1胃組織細(xì)胞凋亡細(xì)胞分布特點(diǎn) 結(jié)果顯示，電子顯微鏡下觀察，SYYY組、WS組與模型組均可見散在的單個(gè)凋亡細(xì)胞，凋亡小體形成。光學(xué)顯微鏡下觀察，空白組和SYYY組凋亡細(xì)胞數(shù)量不多，主要分布在胃粘膜表層；模型組和WS組凋亡的陽性細(xì)胞明顯多于

9、空白組和SYYY組，在整個(gè)胃小凹均可見到，分布無一定規(guī)律。 4.2細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)分析 結(jié)果顯示，7d后的AI，空白組在胃粘膜表層和胃粘膜層底部分別為(1.80±0.39)和(0.51±0.37)；模型組分別為(9.68±0.87)和(4.07±0.44)；WS組分別為(8.89±0.68)和(4.10±0.38)SYYY組分別為(3.01±0.41)和0.53±0.32)。14d后的AI，空白組在胃粘膜表層和胃粘膜

10、層底部分別為(1.78±0.42)和(0.52±0.39)；模型組分別為(7.53±0.61)和(2.22±0.45)；WS組分別為(6.74±0.53)和(2.17±0.53)；SYYY組分別為(1.96±0.38)和(0.52±0.33)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，表明實(shí)驗(yàn)7天后，在粘膜表層SYYY組AI明顯低于模型組和WS組，但明顯高于空白組，均有非常顯著性差異(P＜0.01)；WS組AI明顯低于模型組，有顯著性差異(P＜0.05)，但明顯高

11、于SYYY組和空白組，有非常顯著性差異(P＜0.01)。在粘膜層底部SYYY組AI明顯低于模型組和WS組，有非常顯著性差異(P＜0.01)，與空白組比較無顯著性差異(P＞0.05)；WS組AI明顯高于SYYY組和空白組，有非常顯著性差異(P＜0.01)，與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。實(shí)驗(yàn)14天后，在胃粘膜表層和胃粘膜層底部，SYYY組AI明顯低于模型組和WS組，有非常顯著性差異(P＜0.01)，但與空白組比較已無顯著性差異(

12、P＞0.05)；WS組AI明顯低于模型組，有顯著性差異(P＜0.01)，但仍明顯高于SYYY組和空白組，有非常顯著性差異(P＜0.01)。組間比較，SYYY組、模型組和WS組14天之后的AI較7天后的AI明顯減少，有顯著性差異(P＜0.01)。各組胃粘膜層底部的AI在同一時(shí)間內(nèi)均明顯低于胃粘膜表層(P＜0.01)。 結(jié)論： 1芍藥愈瘍湯能顯著降低乙酸致大鼠胃潰瘍的潰瘍指數(shù)，從而對(duì)胃潰瘍起修復(fù)作用。 2芍藥愈瘍湯能