莜麥中α-淀粉酶抑制劑的分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、α-淀粉酶抑制劑(α-amylase inhibitor，α-AI)屬于糖苷水解酶抑制劑的一種，在大多植物種子的胚乳中都有存在，并且其含量與淀粉含量成正比，淀粉含量越高，α-淀粉酶抑制劑的含量就越高。目前已知的α-AI主要來源于植物、微生物以及人工合成等途徑。天然植物資源中的α-淀粉酶抑制劑以其來源廣泛、對環(huán)境的污染程度小、副作用弱而成為人們關(guān)注的熱點。
　　本文從小雜糧作物莜麥種子中，去殼粉碎，經(jīng)4℃丙酮脫脂、30％-60％硫酸

2、銨分級沉淀、Q-Sepharose fast flow柱層析、Heparin-Sepharose fast flow柱層析以及Sephacryl-200凝膠柱層析，獲得電泳純的α-淀粉酶抑制劑，純化倍數(shù)達41.30，得率1.23％。經(jīng)Superose12凝膠分子排阻層析對獲得的莜麥淀粉酶抑制劑進行天然分子量的測定，比照SDS-PAGE結(jié)果，可知它是以單體形式存在的，相對分子量為23.76kD。對該α-淀粉酶抑制劑的巰基基團數(shù)目的測定，揭

3、示該α-淀粉酶抑制劑含有15個巰基基團，其中形成約為4對分子內(nèi)的二硫鍵。
　　在對莜麥α-淀粉酶抑制劑的性質(zhì)分析中，揭示其不僅可以抑制α-淀粉酶的活性，還可以抑制胰蛋白酶的活性，是一種雙功能抑制劑，并且該抑制劑還具有抗真菌的活性（幾丁質(zhì)酶活性）。電泳純的莜麥α-淀粉酶抑制劑的α-淀粉酶抑制的比活力為26.43 IU/mg，反應(yīng)的最適溫度為40℃，最適pH值為pH8.0，pH穩(wěn)定范圍在6.0-10.0，溫度耐受性強，100℃保溫半小

4、時仍可以保留50％抑制活性，其屬于競爭性抑制類型。對其胰蛋白酶抑制劑活性的分析，揭示其電泳純蛋白的比活力為16.13 IU/mg，在25-55℃間受溫度影響較小，65℃保溫半小時，仍可保留50％以上的活力，反應(yīng)的最適溫度為45℃，pH穩(wěn)定范圍為5.0-10.0，最適pH值為pH8.0，屬競爭性抑制類型，抑制活性低于典型胰蛋白酶抑制。利用實驗室保存的白腐菌（Trametessp.SQ01），毛殼菌（Chaetomiaceae）、紅曲霉（M