黃芪多糖對2型糖尿病大鼠肝臟InsR及其底物IRS-2表達(dá)的影響.pdf

1、背景：大量流行病學(xué)資料顯示，胰島素抵抗(insulin resistance，IR)與2型糖尿病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，而胰島素受體底物(insulin receptor substrate，IRS)與2型糖尿病IR密切相關(guān)，IRS以IRS-1和IRS-2為主。胰島素受體(insulin receptor，InsR)和IRS-2是肝臟胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)核心分子，其基因缺失或信號網(wǎng)絡(luò)上一些關(guān)鍵信號分子的異常改變，都將導(dǎo)致肝臟胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能力減弱

2、，出現(xiàn)肝胰島素抵抗。有研究表明，黃芪多糖(astragalus polysaccharides，APS)可以改善IR，但APS是否通過影響肝臟InsR、IRS-2表達(dá)而改善肝臟IR及其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。
　　 目的：建立以胰島素抵抗為特征的2型糖尿病大鼠模型，觀察APS對模型大鼠肝臟InsR、IRS-2蛋白表達(dá)的影響，及其對IR相關(guān)指數(shù)的影響，探討APS改善2型糖尿病肝胰島素抵抗的作用機(jī)制，為糖尿病的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

3、r>　　 方法：健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠60只，體重240-260g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為正常對照組(NC組，n=10)，給予標(biāo)準(zhǔn)飼料；高脂模型組(HFM組，n=50)，給予高脂飼料。喂養(yǎng)6周末，HFM組的平均體重較NC組平均體重升高20％，認(rèn)為肥胖大鼠造模成功。HFM組繼而用小劑量鏈脲佐菌素(STZ，25mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。72h后尾靜脈采血測量隨機(jī)血糖，隨機(jī)血糖>16.7mmol

4、/L的大鼠納入糖尿病模型組，并在STZ注射2周末復(fù)查隨機(jī)血糖，將血糖未達(dá)標(biāo)大鼠剔除出組。將造模成功大鼠(n=39)隨機(jī)分為糖尿病對照組(DMC組，生理鹽水灌胃，n＝13)、吡格列酮組(Pio組，20mg/kg.d吡格列酮灌胃，n=13)和黃芪多糖組(APS組，400mg/kg.d APS灌胃，n＝13)，同時NC組給予生理鹽水灌胃，各組飲食不變，藥物干預(yù)4周。第12周末予10%水合氯醛腹腔麻醉，心內(nèi)取血用于檢測血漿空腹血糖(FBG)、血

5、清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、空腹胰島素(FINS)，并計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)。分離附睪脂肪墊、腎周及網(wǎng)膜脂肪并稱重，計(jì)算內(nèi)臟脂肪含量(VF/W)。心內(nèi)灌注固定后取大鼠肝臟組織，置于10%多聚甲醛中固定。采用HE染色觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)方法測定肝臟組織InsR和IRS-2蛋白的表達(dá)。并對InsR、IRS-2與FINS、ISI、VF/W之間進(jìn)行相關(guān)分析。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，正態(tài)性檢驗(yàn)

6、a取0.2為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X-±S)表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)，組間兩兩比較采用最小顯著性差(LSD)檢驗(yàn)，兩變量之間的相關(guān)性采用Pearson直線相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1.高脂飼養(yǎng)喂養(yǎng)6周后可誘導(dǎo)SD大鼠明顯腹型肥胖，HFM組體重顯著增加，與NC組比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HFM組和NC組大

7、鼠隨機(jī)血糖比較，差異無顯著性(P>0.05)。小劑量鏈脲佐菌素(STZ，25mg/kg)腹腔注射造模后，模型組大鼠隨機(jī)血糖水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.第12周末，和NC組相比，各組FBG、TG、TC、FINS水平及VF/W升高，ISI降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。和DMC組相比，Pio組及APS組FBG、TG、TC、FINS水平及VF/W降低，ISI水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。APS

8、和Pio組比較，上述各項(xiàng)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。光鏡下觀察各組大鼠肝臟組織形態(tài)：和NC組比較，DMC組大鼠肝臟出現(xiàn)明顯脂肪變性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；和DMC組相比，Pio組及APS組大鼠肝臟脂肪變性得到明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；APS組和Pio組相比，大鼠肝臟脂肪變性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。免疫組織化學(xué)檢測：和NC組相比，DMC組、Pio組及APS組InsR、IRS-2染色平均光密

9、度降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；和DMC組相比較，Pio組及APS組InsR、IRS-2染色平均光密度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Pio組和APS組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相關(guān)性分析顯示，InsR蛋白表達(dá)水平與FINS呈負(fù)相關(guān)，(r=-0.463 P=0.001)，與VF/W呈負(fù)相關(guān)(r=-0.410，P=0.005)，與ISI呈正相關(guān)(r=0.442，P=0.002)，IRS-2蛋白表達(dá)水平與FI