ECHO30所致無菌性腦膜炎爆發(fā)的流行病學和分子生物學研究.pdf

1、目的：本研究的主要目的是對2003年濟南章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)開展全面的調查，從現(xiàn)場流行病學的角度出發(fā)，初步描述所有病例的“三間”分布等基本情況，探討其流行因素；同時，結合血清流行病學、病毒學和分子生物學技術，運用已經建立的血清中和抗體檢測、腸道病毒分離鑒定和RT-PCR快速診斷等方法，從病原學上明確病因，并對分離到ECHO30的VP1段進行基因序列的測定和分析，確定ECHO30山東分離株的基因型及其變異程度。 材料與方法：所有

2、病例信息來源于2003年章丘市無菌性腦膜炎爆發(fā)調查的資料，包括發(fā)病情況調查和個案調查。病原學標本來源于爆發(fā)期內采集的43份糞便標本和24份急性期、14份恢復期血清標本。病毒的分離、型別鑒定以及血清中和抗體試驗按照WHO《脊髓灰質炎實驗室手冊》規(guī)定的方法進行；19株陽性分離株，經Trizol試劑提取總RNA，進行逆轉錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)合成互補脫氧核糖核酸(cDNA)，PCR產物純化后測定VP1基因的全長。借助Sequench

3、er，Bioedit，Mega2.1等軟件進行結果分析。血清流行病學標本采用按比例多級抽樣方法，n=(ts)2/δ=38，設置7個年齡組，發(fā)病地區(qū)(病例組)和未發(fā)病地區(qū)(對照組)各取2各鄉(xiāng)鎮(zhèn)，以每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)每個年齡組20人為標準，每人采集靜脈血3ml。得到血清標本病例組397份，對照組248份，運用中和抗體試驗技術，測定血清中和抗體的滴度。以上所得結果用SPSS12.0進行統(tǒng)計學分析處理。 結果：2003年6～9月，濟南章丘市發(fā)生了

4、無菌性腦膜炎的爆發(fā)，發(fā)病高峰集中在7～8月，發(fā)病1743例，發(fā)病年齡集中在15歲以下，本次爆發(fā)的罹患率1.81‰，5～9歲年齡組高發(fā)，占全部病例數的55％，男女性別比1.57∶1，按照罹患率大小的空間分布，本次爆發(fā)以明水鎮(zhèn)為中心，向東呈扇形分布，臨床表現(xiàn)以發(fā)熱(94.56％)、頭痛(95.96％)、嘔吐(82.87％)為主，預后良好，無致死病例出現(xiàn)。病原學結果提示引起爆發(fā)的病原體為單一的人類腸道病毒ECHO30；理化特性顯示，該分離株為

5、具有“D”特征的強毒株，致病力強。分離株基因序列測定的結果進一步證實病原體為ECHO30，但相較于Bastianni標準株，已經出現(xiàn)了核苷酸序列的變異，進化樹顯示ECHO30山東章丘株已經與2003年山東泰安株、浙江株共同形成了新的基因組；同時認為，分子生物學診斷方法的確立和運用，將加速病原學診斷的過程，降低對病患的傷害，提高經濟和社會效益。血清流行病學結果證實，章丘地區(qū)確實存在ECHO30爆發(fā)和流行，15歲以下健康兒童的中和抗體GMT

6、達到了1∶53.08，高于對照地區(qū)的GMT(1∶32.45)，中和抗體滴度分布集中在1∶64～1∶256之間，抗體陽性率達到90.93％，提示疾病流行過后，人群具有一定的免疫力。流行因素分析認為，此次爆發(fā)應歸結為以下幾個因素共同的作用，該地區(qū)多年未曾有過ECHO30所致疾病的流行，易感人群累積較多；病原體ECHO30亞型發(fā)生了核苷酸的變異，形成了新的基因組，并且毒力較以往的流行株有所提升，具有了強毒株的“D”特征；當地的自然地理條件和飲