表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯對(duì)UVB誘導(dǎo)人原代表皮黑素細(xì)胞光損傷干預(yù)作用的研究.pdf

1、背景： 日光中的紫外線(UV)，主要為長(zhǎng)波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)，是導(dǎo)致皮膚日曬傷、光老化及皮膚癌的重要因素。UVA能穿透皮膚到達(dá)真皮深層，引起免疫抑制，并能介導(dǎo)自由基對(duì)DNA的損傷。UVB照射可導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷及突變頻率增加，自由基及活性氧的形成，局部及系統(tǒng)免疫抑制。在相同劑量下，UVB的光損傷作用比UVA約大800～1000倍。以往認(rèn)為黑素瘤的形成主要與UVA相關(guān)，但近年來(lái)越來(lái)越多的流行病學(xué)數(shù)據(jù)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提

2、示UVB照射與黑素瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。UVB照射引起的細(xì)胞DNA損傷表現(xiàn)為DNA光產(chǎn)物在嘧啶位點(diǎn)的形成，其中75％以上為環(huán)丁烷嘧啶二聚體(CPDs)，剩下部分為6-4光產(chǎn)物((6-4)PPs)及其同源異構(gòu)體。DNA光產(chǎn)物的清除主要通過(guò)核苷酸切除修復(fù)(NER)途徑，當(dāng)損傷細(xì)胞未能得到完全修復(fù)時(shí)，殘余光產(chǎn)物能引發(fā)免疫抑制，最終致腫瘤形成。綠茶提取物茶多酚的主要活性成分表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯((-)-epigallocatechin-3-

3、gallate，EGCG)有著廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如抗氧化、清除氧自由基、預(yù)防腫瘤的發(fā)生和抑制腫瘤細(xì)胞增殖等作用。有實(shí)驗(yàn)報(bào)道EGCG對(duì)UVB誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)光產(chǎn)物的清除有明顯促進(jìn)作用，從而可抑制腫瘤的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)組已經(jīng)就EGCG和UVB干預(yù)對(duì)HaCaT細(xì)胞、人原代成纖維細(xì)胞光產(chǎn)物的影響進(jìn)行了一系列研究，但尚無(wú)黑素細(xì)胞方面的研究和探討。 目的： 觀察黑素細(xì)胞合成培養(yǎng)基培養(yǎng)下人原代表皮黑素細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。觀察UVB誘導(dǎo)人原代表皮黑素

4、細(xì)胞光產(chǎn)物形成和清除情況及EGCG對(duì)此過(guò)程的干預(yù)作用，從而對(duì)黑素細(xì)胞光產(chǎn)物變化情況和EGCG光保護(hù)效應(yīng)進(jìn)行初探。 材料與方法： 1.人原代表皮黑素細(xì)胞的分離和培養(yǎng)：黑素細(xì)胞合成培養(yǎng)基培養(yǎng)人原代黑素細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)情況。定量接種于培養(yǎng)皿或96孔板中進(jìn)行下步實(shí)驗(yàn)； 2.紫外線照射和EGCG干預(yù)處理：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)定時(shí)定量照射培養(yǎng)細(xì)胞，并預(yù)先或在UVB照射后加入藥物進(jìn)行干預(yù)處理； 3.細(xì)胞損傷的形態(tài)學(xué)觀察：光學(xué)顯

5、微鏡觀察紫外線照射對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響； 4.藥物濃度篩選：MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，以定量無(wú)細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)用藥物濃度； 5.光損傷產(chǎn)物形成及清除檢測(cè)：采用免疫熒光法和免疫細(xì)胞化學(xué)法定性檢測(cè)，免疫斑點(diǎn)印跡法定量分析胸腺嘧啶二聚體(CPDs)的形成和清除情況； 6.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)UVB、EGCG處理對(duì)MC凋亡和細(xì)胞周期捕獲的影響。 結(jié)論： 黑素細(xì)胞合成培養(yǎng)基培養(yǎng)人原代黑素細(xì)胞生長(zhǎng)良好，可替代傳統(tǒng)的黑素