幾種中藥有效成分促黑色素生成的機(jī)制研究.pdf

1、白發(fā)是由于黑色素的生成受阻所致，受阻的原因包括：黑素細(xì)胞、黑素體較少，酪氨酸酶活性降低等。臨床上中醫(yī)治療白發(fā)有大量方劑，這些是研究白發(fā)治療的寶貴資源，其中何首烏和黑芝麻在烏發(fā)方劑中頻繁出現(xiàn)，說(shuō)明它們具有很好的促進(jìn)黑色素生成的效果。雖然有關(guān)何首烏和黑芝麻烏發(fā)的研究很多，但對(duì)其烏發(fā)有效成分、烏發(fā)機(jī)理的研究卻仍不深入。本文除了對(duì)何首烏和黑芝麻粗提物的致色素原理作了研究外，還闡明了其中具有顯著增色作用的活性成分和其詳細(xì)作用機(jī)理，佐證了其傳統(tǒng)烏發(fā)

2、功效的現(xiàn)代科學(xué)含義?，F(xiàn)將本文的具體研究?jī)?nèi)容概括如下:
　　 1. 何首烏和黑芝麻水提物均有激活蘑菇酪氨酸酶和促進(jìn)黑素生成的作用，增色效果顯著。采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法和NaOH 裂解法研究了何首烏和黑芝麻水提物或醇提物對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性和黑素生成的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：何首烏的水提物和黑芝麻的水提物在體外對(duì)蘑菇酪氨酸酶的激活及促進(jìn)黑素生成方面都有較強(qiáng)的作用，而醇提物的效果則并不明顯。
　　 2. 何首烏和黑芝麻水提物都能

3、顯著增強(qiáng)B16 黑素瘤細(xì)胞中的黑色素生成，對(duì)細(xì)胞增殖、黑素生成和酪氨酸酶活性均有不同程度的激活作用，并可促進(jìn)黑素生成相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。采用B16 黑素瘤細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，檢測(cè)了何首烏水提物和黑芝麻水提物對(duì)細(xì)胞內(nèi)黑素含量和酪氨酸酶活性的影響，同時(shí)利用RT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)了其對(duì)黑素生成相關(guān)基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：在B16 黑素瘤細(xì)胞中，何首烏水提物和黑芝麻水提物都能濃度依賴性地增加酪氨酸酶活性和黑素的生成，并促進(jìn)酪

4、氨酸酶和小眼相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（Microphthalmia-associtated transcription factor，MITF）
　　 基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上的表達(dá)。
　　 3. 何首烏的有效成分二苯乙烯苷可通過(guò)激活有絲分裂原活化蛋白激酶p38MAPK和轉(zhuǎn)錄因子MITF，上調(diào)酪氨酸酶基因的表達(dá)，增加酪氨酸酶的活性，從而促進(jìn)B16 黑素瘤細(xì)胞中黑素的生成。用L-多巴染色法檢測(cè)了二苯乙烯苷對(duì)酪氨酸酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)二苯乙

5、烯苷促進(jìn)黑素生成的機(jī)理之一是它可以劑量依賴性地增加酪氨酸酶的活性。RT-PCR 以及Western-blot檢測(cè)結(jié)果則顯示二苯乙烯苷能促進(jìn)酪氨酸酶基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上的表達(dá)。利用Western-blot方法還發(fā)現(xiàn)二苯乙烯苷可以導(dǎo)致酪氨酸酶重要轉(zhuǎn)錄因子MITF的激活，并誘導(dǎo)環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白CREB的磷酸化表達(dá)水平升高，說(shuō)明MITF的激活可能是依賴于環(huán)腺苷酸（cAMP）的。另外，Westemblot法檢測(cè)二苯乙烯苷對(duì)不同MAPk途

6、徑關(guān)鍵激酶磷酸化蛋白表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)它可以激活磷酸化p38 MAPK的表達(dá)，MAPk信號(hào)通路抑制劑實(shí)驗(yàn)則從反向證明了二苯乙烯苷能通過(guò)激活p38 MAPk信號(hào)通路來(lái)上調(diào)酪氨酸酶和MITF基因的表達(dá)，從而促進(jìn)B16細(xì)胞中黑素的生成過(guò)程。
　　 4. 闡明了芝麻中具有顯著增色作用的有效成分是芝麻素，芝麻素可通過(guò)激活有絲分裂原活化蛋白激酶p38 MAPK和cAMP 依賴的蛋白激酶A（PKA）信號(hào)通路來(lái)上調(diào)酪氨酸酶和MITF基因的表達(dá)，從

7、而促進(jìn)B16 黑素瘤細(xì)胞中黑素的生成。芝麻素對(duì)黑色素的生成和細(xì)胞形態(tài)的黑素化表現(xiàn)出劑量依賴性地促進(jìn)作用。研究發(fā)現(xiàn)，芝麻素促進(jìn)黑素生成的機(jī)理之一是上調(diào)酪氨酸酶基因的表達(dá)并增加酪氨酸酶的活性。另外，芝麻素可以促進(jìn)p38 MAPK和環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白CREB的磷酸化表達(dá)水平升高，并引起MITF的持續(xù)激活，說(shuō)明MAPK和PKA信號(hào)通路可能參與了芝麻素誘導(dǎo)的黑素生成過(guò)程。還發(fā)現(xiàn)芝麻素可以導(dǎo)致PKA活性的增加，誘導(dǎo)CRE 啟動(dòng)子的激活，并使細(xì)