強血管生成促進劑SDY-08的促組織修復作用.pdf

1、背景與目的：血管生成(angiogenesis)是指從已存在的微血管床上芽生出新的以毛細血管為主的血管系統(tǒng)的過程。這一過程包括毛細血管內皮細胞的增殖和遷移。在正常生理狀態(tài)下，人體血管內皮細胞的倍增時間約為1年。人體只有在較特殊的環(huán)境下才會出現(xiàn)血管生成，例如創(chuàng)傷愈合，胚胎發(fā)生和女性經(jīng)期等。組織修復的關鍵環(huán)節(jié)之一為血管新生，血管新生好壞直接影響組織修復的速度，因此血管再生調控一直是組織修復研究關注的焦點之一。自從70年代初。美國哈佛醫(yī)學院的

2、Folkman J博士[27]最早預言了用促進血管生成即“治療性血管生成”的方法治療缺血性疾病的前景后，特別是近20年來，人們對血管生成因子，如血管內皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)家族、成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor,FGF)家族和血管生成素(Angiopoietins)家族及它們的受體家族和血管生成抑制物(如血小板因子4、Angio

3、statin、Endostatin及Vasostatin等)進行了廣泛而深入的研究，提出了內源性血管生成因子與血管生成抑制因子間的“平衡與失衡”理論。在眾多血管生成因子中VEGF是最受關注的，它在組織修復過程中具有廣泛的調節(jié)作用。通過藥物的干預或促進VEGF的表達與釋放從而達到治療目的，已經(jīng)成為組織修復研究中受到人們廣泛關注的入路。海洋生物體內含有眾多的海洋生物活性物質，從海洋生物活性物質篩選新藥及其先導體，是新藥研究和開發(fā)的重要途徑。

4、SDY-08是本實驗室從海洋生物中分離出來的一種活性成分，我們通過以下實驗檢測其對血管生成和創(chuàng)傷愈合的影響并初步探討了其作用機理。方法：1.MTT法檢測SDY-08對人臍靜脈血管內皮細胞(human umbilical vein endothelialcells，HUVECs)生長的影響。2.建立雞胚絨毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane，CAM)模型，檢測SDY-08對CAM血管生成的影響

5、。3.建立小鼠皮膚創(chuàng)傷模型，檢測SDY-08對小鼠創(chuàng)傷愈合的影響。4.免疫組化法檢測SDY-08對創(chuàng)傷周圍組織血管內皮細胞VEGF表達的影響。5.蛋白免疫印跡法檢測SDY-08對HUVECs細胞VEGF表達的影響。 結果：1.SDY-08可明顯促進HUVECs細胞的生長，其誘導效果與SDY-08的劑量相關。終濃度為10、20、40和80μg/ml的SDY-08作用HUVECs細胞24h，其細胞增值誘導率(Promotion ra

6、te，PR)分別為7.8％、23.4％、79.2％和115.6％。終濃度為80μg/ml的SDY-08作用HUVECs細胞12h、24h和36h的細胞增值誘導率分別為28.1％、115.6％和81.4％。2.SDY-08能夠誘導CAM血管的生成，并與劑量相關。SDY-08(30μg/胚/天×3)、SDY-08(60μg/胚/天×3)、SDY-08(120μg/胚/天×3)、SDY-08對CAM血管生成的誘導率分別為27.9、47.4、和

7、70.9％。3.SDY-08顯著促進小鼠創(chuàng)傷愈合。高劑量組第8天12只小鼠中有4只創(chuàng)傷愈合，而對照組第9天12只小鼠中才有1只愈合；經(jīng)SDY-08處理的小鼠第11天創(chuàng)傷全部愈合，且愈合的創(chuàng)面平滑，而對照組創(chuàng)面長期結痂，第11天只有6只愈合，第12天才全部愈合；SDY-08高劑量組創(chuàng)面愈合平均時間為9.1±1.3 d，較對照組11.2±0.92 d提前2天，差異非常明顯。4.SDY-08上調小鼠創(chuàng)傷周圍組織VEGF的表達。實驗組的小鼠創(chuàng)傷

8、周圍組織血管內皮細胞胞漿和胞膜VEGF表達呈陽性或強陽性，呈深棕黃色顆粒狀，局灶性或彌漫性分布，而對照組大多數(shù)細胞VEGF表達呈弱陽性。5.SDY-08上調HUVECs細胞VEGF的表達，并與劑量呈正相關。結論：1.SDY-08能促進HUVECs細胞的生長，其作用效果與劑量成正相關。2.SDY-08能誘導CAM的血管生成，并與劑量成正相關。3.SDY-08具有促進傷口愈合的作用。4.SDY-08能夠增強創(chuàng)傷組織血管內皮細胞VEGF的表達