小鼠視網(wǎng)膜紫外線光損傷發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1.制備較理想的視網(wǎng)膜紫外線光損傷的小鼠模型。 2.探討凋亡相關(guān)蛋白Fas、FasL、Bcl-2及Bax在視網(wǎng)膜紫外線光損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法:將30只昆明小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組再分為紫外線光照1、2、3、4周組，所有小鼠經(jīng)晝夜循環(huán)光環(huán)境適應(yīng)7天，實(shí)驗(yàn)前暗適應(yīng)36小時(shí)，建立紫外線光損傷模型，實(shí)驗(yàn)組接受每天持續(xù)8小時(shí)的紫外線光照射，光照強(qiáng)度為2200±138Lux，分別在照射后1、2

2、、3、4周后摘除眼球，右眼行視網(wǎng)膜HE及Fas、FasL、Bcl-2、Bax染色，左眼行視網(wǎng)膜勻漿中SOD活力、MDA含量檢測(cè)；光鏡觀察視網(wǎng)膜的形態(tài)學(xué)改變并對(duì)比各組視網(wǎng)膜ONL層厚度的差異，應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法比較Fas、FasL、Bcl-2及Bax在各組視網(wǎng)膜陽(yáng)性表達(dá)數(shù)量的差異。 結(jié)果: 1.光照前正常小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)正常，組織結(jié)構(gòu)層次清楚，內(nèi)外節(jié)排列整齊，外核層細(xì)胞排列規(guī)則，染色均勻，細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，F(xiàn)as、FasL、

3、Bcl-2、Bax染色陰性及弱陽(yáng)性。光照后小鼠視網(wǎng)膜感光細(xì)胞層出現(xiàn)了光損傷，光鏡示不同程度的外節(jié)空泡樣變，內(nèi)外節(jié)排列紊亂、腫脹、碎解，外核層變薄，出現(xiàn)核濃染及不規(guī)則細(xì)胞核，隨光照后時(shí)間推移而損傷逐漸加重。Fas、FasL蛋白分別自損傷后一周開始看到陽(yáng)性細(xì)胞或表達(dá)增強(qiáng)，并隨時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)增強(qiáng)，3w時(shí)達(dá)高峰；Bcl-2隨光照時(shí)間延長(zhǎng)稍有增強(qiáng)；Bax表達(dá)呈持續(xù)增強(qiáng)。 2.通過計(jì)算機(jī)輔助圖像分析對(duì)比各組外核層厚度變化，紫外線光照組光照后

4、外核層（ONL）厚度與正常對(duì)照組比較明顯變薄，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），實(shí)驗(yàn)組各組之間除光照3w組與光照4w組外，其余各組之間比較差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 3.紫外線光照組光照后SOD活力、MDA含量與正常對(duì)照組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論:中長(zhǎng)波紫外線光能夠引起小鼠視網(wǎng)膜的光損傷；其損傷程度為光照強(qiáng)度及時(shí)間依賴性。視網(wǎng)膜紫外線光損傷與脂質(zhì)過氧化及自由基的產(chǎn)生有關(guān)。凋亡相關(guān)基因蛋白Fa