苦杏仁的品種整理和質(zhì)量研究.pdf

1、苦杏仁為多基源品種,《中華人民共和國藥典》2005版一部規(guī)定苦杏仁來源于薔薇科(Rosaceae)植物山杏(Prunus armeniaca L.Var.ansuMaxim.)、西伯利亞杏(Prunus sibirica L.)、東北杏(Prunus mandshurica(Maxim.)Koehne)或杏(Prunus armeniaca L.)的干燥成熟種子。主要有效成分為苦杏仁苷和脂肪油,具有降氣、止咳、平喘、潤腸通便之功效。由于

2、其來源復(fù)雜,分布廣泛,加之栽培及采收加工欠規(guī)范,常導(dǎo)致飲片質(zhì)量不穩(wěn)定,亦無有效的質(zhì)量評價(jià)方法,致使其質(zhì)量控制一直比較困難。據(jù)調(diào)查,目前市場上流通的作為苦杏仁入藥的植物種子主要有6種,除山杏、西伯利亞杏、東北杏、杏與藥典一致外,其余兩種紫杏(Prunus armeniacadasycarpa(Ehrh.)Borkh)、毛杏(Prunus armeniaca(L.)Lam.var.pubescensKost)均未收入藥典。本課題主要從薄層鑒

3、別、含量測定和HPLC指紋圖譜三個(gè)方面對上述苦杏仁進(jìn)行系統(tǒng)的品種整理和質(zhì)量研究,制定苦杏仁的質(zhì)量評價(jià)方法。
　　 目的:通過薄層色譜法對苦杏仁藥材進(jìn)行定性鑒別,并采用高效液相色譜法測定苦杏仁中苦杏仁苷的含量,從而建立一種快速、高效的質(zhì)量控制方法。同時(shí)建立苦杏仁藥材的HPLC指紋圖譜,獲得對照圖譜,并與不同品種苦杏仁藥材指紋特征相對照,為科學(xué)評價(jià)和有效控制苦杏仁質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1薄層鑒別研究

4、:采用薄層色譜法,選用合適的提取方法和提取溶劑,以及適宜的固定相、展開系統(tǒng)、顯色系統(tǒng),對苦杏仁進(jìn)行定性鑒別。
　　 2苦杏仁的含量測定:(1)提取:考察不同提取方法、不同提取溶劑對提取苦杏仁藥材中有效成分的影響,選取影響提取效率的溶劑用量、提取時(shí)間、提取次數(shù)三個(gè)主要因素,采用正交試驗(yàn)對質(zhì)量分析測定的前處理工藝進(jìn)行優(yōu)化,選擇提取效率較高的提取條件。(2)色譜條件:選擇合適的固定相,調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速,調(diào)節(jié)柱溫,以使苦杏仁

5、苷色譜峰與雜質(zhì)峰分離度較好。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:配制系列濃度的苦杏仁苷對照品溶液,分別進(jìn)樣,測定峰面積,以苦杏仁苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),相應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。(4)精密度試驗(yàn):分別取同一份對照品溶液和供試品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,測定峰面積,并計(jì)算RSD值。(5)重復(fù)性試驗(yàn):取同一批苦杏仁藥材6份,制備供試品溶液,分別進(jìn)樣,測定峰面積,并汁算RSD值。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):分別取同一份對照品溶液和供試品溶液,分別于放置0,4,8,12,

6、24,48 h后進(jìn)樣,測定峰面積,并計(jì)算RSD值。(7)回收率試驗(yàn):取苦杏仁藥材適量,分別加入等量的苦杏仁苷對照品,測定苦杏仁苷的含量,計(jì)算平均回收率和RSD值。(8)檢測限的測定:將苦杏仁苷對照品溶液逐步稀釋,當(dāng)信噪比S/N≥3時(shí)確定為最低檢測限。(9)樣品測定:在上述色譜條件下,測定18批苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量。
　　 3苦杏仁指紋圖譜的建立:(1)提取:比較了不同提取方法、不同提取溶劑及不同提取時(shí)間的提取效果,選擇提取

7、成分較多,提取效率較高的提取條件。(2)色譜條件:選用合適的色譜柱及檢測波長,調(diào)整流動(dòng)相的組成、配比、流速,調(diào)節(jié)柱溫,使色譜圖符合指紋圖譜研究的要求。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在已確定的色譜條件下,考察指紋圖譜中苦杏仁苷峰的分離度和理論板數(shù)。(4)精密度試驗(yàn):取同一份樣品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄保留時(shí)間和峰面積。(5)重復(fù)性試驗(yàn):取同一批苦杏仁藥材6份,平行制備樣品溶液,進(jìn)樣,記錄保留時(shí)間和峰面積。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品溶液分別于0,4,

8、8,12,24,48 h進(jìn)樣,記錄保留時(shí)間和峰面積。(7)指紋圖譜的建立:分別取同一品種不同產(chǎn)地苦杏仁藥材10批,其他不同品種的苦杏仁藥材8批,制備供試品溶液,進(jìn)行指紋圖譜分析。
　　 結(jié)果:
　　 1苦杏仁的薄層鑒別的研究:采用相應(yīng)的薄層鑒別方法,薄層展開后,在供試品色譜中,與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。
　　 2苦杏仁的主要成分苦杏仁苷的含量測定:(1)提取:確定了對苦杏仁中的苦杏仁苷進(jìn)行含量測定

9、的處理工藝:50倍甲醇超聲提取一次,提取時(shí)間為30 min。(2)色譜條件:采用安捷倫C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；甲醇.水(15:85)為流動(dòng)相；流速1.0 ml·min-1；柱溫30℃；檢測波長為210 nm；進(jìn)樣量10μl。在此色譜條件下,苦杏仁苷峰保留時(shí)間約為12 min,分離度大于1.5,理論塔板數(shù)不低于4000。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:苦杏仁苷在0.138-13.8μg范圍內(nèi),線性關(guān)系良好?；貧w方程為Y=

10、513.57X+20.704,r=0.9999(n=6)(4)精密度試驗(yàn):儀器和方法的精密度良好,RSD值分別為0.71％、0.78％。(5)重復(fù)性試驗(yàn):樣品的重復(fù)性好,RSD值為0.76％(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):對照品溶液和樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定,RSD分別為1.44％、1.25％。(7)回收率試驗(yàn):樣品平均回收率為99.5l％,RSD為1.81％。(8)苦杏仁苷的最低檢測限為40.1032 ng。(9)苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量為0.0

11、724％.5-668％。
　　 3苦杏仁指紋圖譜的建立:(1)提取:以70％甲醇超聲60 min為佳,具有穩(wěn)定和效率高等優(yōu)點(diǎn)。(2)色譜條件:色譜柱為Waters Symmetry C18柱(4.6×250 mm,5μm)；乙腈.水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度沈脫；流速為1.0ml·min-1；柱溫為30℃；檢測波長為225 nm；進(jìn)樣量10μl。(3)系統(tǒng)適用性試驗(yàn):在此色譜條件下,苦杏仁苷的保留時(shí)間約為20 min,按苦杏仁苷峰計(jì)算理論

12、板數(shù)約為50000,與其它色譜峰的分離度大于1.0。(4)精密度試驗(yàn):以苦杏仁苷峰為內(nèi)參比峰,計(jì)算各主要色譜峰相對保留時(shí)間和峰面積占總峰面積5％以上峰的峰面積值,其RSD分別為0.009％-0.26％和1.01％-2.43％,精密度良好。(5)重復(fù)性試驗(yàn):各主要色譜峰相對保留時(shí)間和占總峰面積5％以上色譜峰的相對峰面積均無明顯變化,其RSD分別為0.009％-1.04％和1.76％-2.59％,重復(fù)性良好。(6)穩(wěn)定性試驗(yàn):在48 h內(nèi),

13、各主要色譜峰相對保留時(shí)間和峰面積占總峰面積5％以上峰的峰面積比值均無明顯變化,其RED分別為0.009％-0.32％和1.07％-2.35％,穩(wěn)定性良好。(7)指紋圖譜的建立:得到苦杏仁藥材的指紋圖譜,生成對照指紋圖譜,同時(shí)得到不同品種苦杏仁藥材的指紋圖譜。(8)數(shù)據(jù)分析:運(yùn)用相似度評價(jià)系統(tǒng)2004A版軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,所得結(jié)果能反映苦杏仁藥材的質(zhì)量。
　　 結(jié)論:
　　 1薄層色譜法所得斑點(diǎn)清晰圓整,專屬性強(qiáng),重