不同中藥組方烏發(fā)作用的體外實驗研究.pdf

1、伴隨著社會的不斷進(jìn)步、生活水平不斷提高的同時,人們生活節(jié)奏的加快、工作和生活壓力的增加、飲食不規(guī)律等種種因為引起毛發(fā)的異常,過早出現(xiàn)的白發(fā)、脫發(fā)等毛發(fā)性疾病給工作和生活帶來了嚴(yán)重的影響?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為:白發(fā)是因毛球中黑素細(xì)胞形成黑色素的功能減退、酪氨酸酶的活性減低或喪失、毛干中缺乏黑色素而引起。中醫(yī)認(rèn)為白發(fā)、脫發(fā)的形成與肝腎不足、血氣虛弱有關(guān),中醫(yī)多從養(yǎng)血活血補(bǔ)肝益腎上進(jìn)行治療。
　　 毛發(fā)之所以會呈現(xiàn)不同的顏色,是由于毛發(fā)內(nèi)黑素

2、含量和黑素顆粒所致,其數(shù)量越多、密度越大,頭發(fā)則越呈黑色,反之頭發(fā)顏色則淺淡。毛發(fā)黑素由毛囊黑素細(xì)胞合成,其合成代謝可分為黑素生成、轉(zhuǎn)移和融化三個階段,任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)障礙均會影響黑素代謝,從而導(dǎo)致毛發(fā)顏色變化。
　　 酪氨酸酶為黑素合成的關(guān)鍵酶,皮膚和毛囊的黑素細(xì)胞內(nèi)酪氨酸酶系統(tǒng)的功能減退、喪失會引起皮膚色素的減少或喪失,從而導(dǎo)致相應(yīng)的疾病,如毛發(fā)枯黃、無色澤、易折斷等。
　　 典籍記載:黑芝麻、蒸首烏、當(dāng)歸養(yǎng)血益精；

3、柏葉、旱蓮草涼血烏須而黑發(fā)；柏子仁養(yǎng)心安神,善治血虛、心悸、失眠。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明,當(dāng)歸可促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖、黑素生成及激活酪氨酸酶活性。制首烏提取物對黑素細(xì)胞體外增殖及遷移均有明顯的促進(jìn)作用。黃芩提取物可促進(jìn)小鼠黑素瘤B16細(xì)胞增殖、激活酪氨酸酶活性、提高黑素含量。黑芝麻、薄荷、何首烏、黃芩、菟絲子、獨活等具有激活酪氨酸酶的作用；可以使皮膚出現(xiàn)不同程度的色素沉著;表皮基底層及部分棘細(xì)胞中下層色素增加和多巴陽性細(xì)胞增多。
　　 具有

4、產(chǎn)生黑素功能的鼠B16黑素瘤細(xì)胞株,在國內(nèi)外已被廣泛用于研究化合物或藥物對黑素的產(chǎn)生及酪氨酸酶活性的影響。
　　 本實驗經(jīng)理論研究和文獻(xiàn)篩選,選取出現(xiàn)頻率較高具有烏發(fā)作用的中藥依照中醫(yī)理論進(jìn)行合理配伍、組方。采用多巴氧化法觀察不同中藥組方水、乙醇提取物對酪氨酸酶活性的影響；將其提取物施加于培養(yǎng)黑素瘤B16細(xì)胞,研究其是否具促黑色瘤細(xì)胞增殖及促黑素生成的作用,進(jìn)而揭示各中藥組方是否具烏發(fā)作用并為后續(xù)的組織培養(yǎng)和動物實驗提供參考依據(jù)

5、。
　　 目的觀察6種中藥組方的水、醇提取物對酪氨酸酶活力和對小鼠B16黑素瘤細(xì)胞增殖及黑素生成的影響。
　　 方法
　　 1.以左旋多巴為底物,采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法體外測定酪氨酸酶活性,在490nm處測定吸光度。
　　 2.以MTT法測定各中藥組方提取物不同濃度組的B16黑素瘤細(xì)胞增殖活性。
　　 3.NαOH裂解法測定各中藥組方提取物不同濃度組B16黑素瘤細(xì)胞的黑素生成量。
　

6、　 結(jié)果
　　 1 6種中藥組方水提物均具有酪氨酸酶的激活作用,并且隨著濃度的增加,酪氨酸酶活性逐漸增強(qiáng),呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。6種中藥組方醇提物除了組方1外,其它組方均具有酪氨酸酶的激活作用,且隨著濃度增加,酪氨酸酶活性逐漸增強(qiáng),呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。其中,水提物中酪氨酸酶激活率最高的是組方2,達(dá)32.43％(1 mg/ml)；醇提物中酪氨酸酶激活率最高的是組方5,達(dá)13.20％(1 mg/ml)。除了組方5外,其它組方水提物對酪氨

7、酸酶作用均較醇提物顯著。
　　 2 6種中藥組方中,組方1、2、3、5水提物和組方2、4、5、6醇提物具促細(xì)胞增殖作用(P<0.05)；水提物中細(xì)胞增殖率最高的為組方2,在0.625 mg/ml濃度水平時增殖率為22.60％；醇提物中細(xì)胞增殖率最高的為組方4,在0.078mg/ml濃度水平時增殖率為11.60％。組方濃度高(10 mg/ml)時可抑制細(xì)胞生長,可觀察到細(xì)胞形態(tài)的異常,甚至可觀察到死亡的細(xì)胞,即高濃度具有細(xì)胞毒性的

8、作用,其中毒性較強(qiáng)的是組方5水提物。
　　 3 組方水提物和醇提物均具有促進(jìn)黑色素合成的作用(P<0.05)。水提物中黑素增率最高的為組方1,在0.313 mg/ml濃度水平時增率為75.38％；醇提物中黑素合成增率最高的為組方1,在1.25 mg/ml濃度水平時增率為88.01％。
　　 結(jié)論
　　 全部組方水提物和組方2、3、4、5、6醇提物均具有酪氨酸酶的激活作用;組方1、2、3、5水提物和組方2、4、5、